Evaluación de los efectos de las toxinas en el desarrollo de redes neuronales de embriones de pollo mediante matrices de electrodos múltiples

1. Registro de la actividad de la red neuronal

1. El día de la adquisición, cambie el medio de cultivo por un medio neurobasal fresco y devuelva los MEAs a la incubadora de CO₂ durante un mínimo de 2 h antes del registro. Inicie el software de grabación y ajuste la temperatura del MEA a 37 °C haciendo clic en el icono de temperatura.
   nota: El registro puede comenzar tan pronto como el día 3 de la siembra y puede continuar mientras los cultivos estén vivos.
2. Configure los parámetros de adquisición haciendo clic con el botón derecho en el icono "Muse" (en Flujos en el panel de la ventana izquierda) y seleccione "Agregar procesamiento" y "Detector de picos" y haga clic en Aceptar en la ventana emergente. "Spike Detector (6 x STD)" aparecerá debajo del nombre del archivo.
3. A continuación, haga clic con el botón derecho en el detector de picos, seleccione "Agregar procesamiento" y "Detector de ráfagas" y haga clic en Aceptar en la ventana emergente. "Detector de ráfagas" (ISI) aparecerá debajo del icono de Muse.
4. A continuación, haga clic con el botón derecho en Burst Detector, seleccione "Agregar procesamiento" y "Compilador de estadísticas neuronales". En la ventana emergente, asegúrese de que estén seleccionadas Encabezado de archivo, Estadísticas de pozos agregados y Sincronía. Haga clic en Aceptar. "Compilador de estadísticas" aparecerá debajo.
   nota: Esto establecerá el cruce de umbral adaptativo (filtro STD 6x), el intervalo entre picos en 100 ms con un número mínimo de picos en 5, la detección de la velocidad de disparo media en 10 s con un parámetro de sincronía en 20 ms, y la velocidad mínima de pico en 0,0833333 picos por minuto.
5. Configure la grabación programada para el tiempo de grabación de 5 minutos (300.000 ms) haciendo clic en el icono del reloj en la parte inferior. Esto se logra cambiando la información en la sección de configuración para grabar cada 5,1 minutos y grabar durante 5 minutos. Esto se iniciará inmediatamente y se ejecutará una vez.
6. Asegúrese de que la temperatura del MEA haya alcanzado los 37 °C antes de moverlo. Retire el MEA de la incubadora, colóquelo en la unidad de registro y bloquee el MEA. Comience a registrar la actividad de la red haciendo clic en el registro de inicio en la sección de grabación programada o en el icono de grabación en la ventana "Reproducción de archivos". Normalmente, un tiempo de grabación de 5 minutos (300.000 ms) es suficiente, aunque se pueden obtener grabaciones más largas de hasta 10 minutos.
7. Después de la grabación, devuelva el MEA a la incubadora.
   nota: Se debe tener cuidado de mantener la esterilidad y minimizar el tiempo que el MEA está fuera de la incubadora.