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Cuantificación de la distribución de una proteína presináptica en el cerebro de ratón mediante inmunofluorescencia

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Fuente: Wallrafen, R., et al. Cuantificación de la distribución heterogénea de una proteína sináptica en el cerebro de ratón mediante inmunofluorescencia. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra la tinción de inmunofluorescencia de un corte de cerebro de ratón para cuantificar la distribución de una proteína presináptica específica. El proceso consiste en el bloqueo de sitios inespecíficos, la aplicación de anticuerpos primarios para la proteína diana y un marcador de referencia, seguido de un marcaje de anticuerpos secundarios y una contratinción nuclear. El marcador de referencia garantiza una cuantificación precisa al proporcionar una línea de base consistente, y la distribución de la proteína presináptica se analiza a través de las regiones del cerebro mediante microscopía confocal.

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

1. Inmunofluorescencia

  1. Prepare soluciones que incluyan el tampón de bloqueo, el tampón de anticuerpos, el tampón de lavado 1 y el tampón de lavado 2 (ver Tabla 1).
  2. Enjuague las rodajas una vez con tampón de fosfato (PB) para eliminar el exceso de compuesto de temperatura óptima de corte (OCT).
    1. Retire la solución con una pipeta de plástico sin succionar las rodajas de cerebro. Añadir 250 μL de PB fresco con una pipeta de 1000 μL.
      ....

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Disclosures

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
No se han declarado conflictos de interés.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Tubos de reacción de 1,5 mLEppendorf30120094
Tubos de reacción de 50 mLGreiner Bio-One227261
Pozo múltiple 24 pozosFisher Científico087721H
Pipeta de plástico (desechable)Sarstedt8,61,176
Pipeta de 1000 mLLluvia17014382
Pipeta de 2 mlEppendorf3123000012
Genio del vórtice 3IKA3340001
Portaobjetos de microscopio MenzelFisher Científico10144633CF
estereoscopioLeica
LSM800ZeissMicroscopio confocal
PBS (10X)Roche11666789001
Tejido TekSakura4583oct
Na2HPO4BioFroxx5155KG001
NaH2PO4Merck1,06,34,60,500
Suero de cabra normalMerck MilliporeS26-100ML
Suero de burro normalMerckS30-100ML
Tritón X-100Merck1,08,60,31,000
conejo anti-MoverSistemas sinápticosRRID: AB_10804285
conejillo de indias anti-SinaptofisinaSistemas sinápticosRRID: AB_1210382
burro anti-conejo AF647Jackson ImmunoResearchRRID: AB_2492288
antiratón para cabras AF488Jackson ImmunoResearchRRID: AB_2337438
Mowiol4-88Calbiochem475904
Software ZEN2 azulZeissSoftware de microscopía
FijiImagenJSoftware de análisis
Microsoft ExcelMicrosoft

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