Neuropatología

Para detectar la atrofia cerebral, comience con portaobjetos que contengan las secciones cerebrales desparafinadas de modelos de ratones neurodegenerativos a varias edades.

Para visualizar estas NPs, tome una sección fija y desparafinada del cerebro humano.

Agregue agua destilada doble para lavar las secciones.

Tratar el tejido con tetróxido de osmio para estabilizar las estructuras celulares, incluida la lipofuscina.

Homogeneizar el tejido para liberar proteínas en el tampón. Los inhibidores de la proteasa bloquean la actividad de la proteasa, evitando la degradación de las proteínas.

Agregue un tampón de carga que contenga un detergente, un agente reductor y un tinte de seguimiento.

Incubar con una enzima proteolítica para digerir los priones normales, dejando intactos los agregados resistentes.

Incubar con solución de peróxido de hidrógeno para inhibir las peroxidasas endógenas y evitar tinciones inespecíficas.

Estas secciones contienen ovillos neurofibrilares, agregados anormales de la proteína tau que se encuentran dentro de las neuronas del hipocampo.

Para visualizar el sulfato de hepán, comience con una sección de tejido del hipocampo humano enfermo que contenga placas amiloides.

Centrifugar la muestra para pellets los restos celulares y recoger el sobrenadante.

Este protocolo describe la extracción de proteínas de células de cáncer neuronal. Las células se lavan con un tampón y se lisan mediante disrupción enzimática y mecánica. El sobrenadante rico en proteínas extraído se recoge después de la centrifugación.

Este video muestra el procedimiento para teñir fluorescentemente neuronas corticales de rata para microscopía. Se dirige a las proteínas F-actina y dendríticas para analizar la integridad estructural y calcular la densidad de F-actina, que es crucial para estudiar la función y la salud neuronal.

Este video demuestra el protocolo para aislar fibrillas de amiloide del extracto de tejido cerebral de ratón utilizando centrifugación en gradiente de densidad y digestión de proteínas no amiloides.

Este video describe la generación de un modelo de lesión neuronal utilizando especies reactivas de oxígeno (ROS) en neuronas cerebelosas primarias de ratón. En él se detalla el proceso de inducción del estrés oxidativo mediante la adición de altas concentraciones de peróxido de hidrógeno. La exposición a las ROS provoca roturas de cadenas de ADN e inestabilidad genómica. Además, la oxidación de las proteínas celulares perjudica sus funciones, mientras que la peroxidación lipídica compromete la...

Este video muestra un método para evaluar los efectos neurotóxicos de las nanopartículas utilizando microglía. Describe los pasos para activar la microglía con nanopartículas, filtrar los medios condicionados para aislar las citocinas proinflamatorias derivadas de la microglía y probar la toxicidad de las neuronas hipotalámicas con los medios condicionados.

El video muestra cómo inducir neurodegeneración en los nervios segmentarios de la larva de Drosophila a través de una lesión mecánica. La cutícula ventral de las larvas anestesiadas se pellizca con fórceps para causar lesiones en los nervios segmentarios. Las larvas lesionadas se mantienen con comida, lo que permite que la lesión cause la degeneración de las neuronas motoras de los nervios, causando la interrupción de sus uniones neuromusculares (NMJ).

Este video muestra un procedimiento para crear un modelo de rata de la enfermedad de Parkinson inyectando la neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA) en el cerebro. La infusión de neurotoxinas en el haz medial del prosencéfalo (MFB) se dirige específicamente a las neuronas dopaminérgicas responsables del control motor, lo que lleva a su destrucción y replica los síntomas de la enfermedad de Parkinson.

En este video, se muestra un protocolo paso a paso para células madre embrionarias humanas en organoides neuronales. El método consiste en inducir la formación de rosetas neuronales, seguida de una maduración controlada y un cultivo final en una membrana hidrofóbica para lograr organoides neuronales completamente desarrollados.

Este video demuestra la diferenciación de células madre embrionarias humanas (hESCs) en neuronas dopaminérgicas, para proporcionar un modelo para el estudio de la enfermedad de Parkinson. Las hESCs se cultivan en un medio de inducción neural en una placa de micropocillos para formar neuroesferas 3D. A continuación, se cultivan en un medio de inducción neuronal para promover la diferenciación en neuronas progenitoras dopaminérgicas. La maduración final de las neuronas se produce en un inserto de...

Este video muestra una evaluación in vitro del colapso del cono de crecimiento neuronal por agregados de β de amiloide (Aβ). El tratamiento de las neuronas con agregados Aβ provoca la desestabilización del citoesqueleto, lo que provoca el colapso de los conos de crecimiento en la punta de los axones. Las células tratadas se comparan con las células de control para evaluar el grado de colapso del cono de crecimiento.

El video muestra un procedimiento para preparar cortes de cerebro cortical humano de pacientes con enfermedad de Alzheimer para analizar la deposición de péptidos de beta amiloide (Aβ) utilizando espectrometría de masas de imágenes de desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI-IMS). Los pasos incluyen la preparación de los portaobjetos, el tratamiento del tejido para mejorar la ionización y el análisis de la distribución espacial de los péptidos de beta amiloide.

Este video muestra la inmunotinción de neuronas tratadas con agregados de alfa-sinucleína (αS). Las neuronas se tratan primero con agregados αS. A continuación, se fijan, se permeabilizan y se tratan con una solución de bloqueo. Se añaden anticuerpos primarios, seguidos de anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia y una tinción nuclear. A continuación, la muestra se monta y se observa al microscopio.

Este video muestra un procedimiento para inducir la degeneración de la retina en peces cebra adultos utilizando lesiones por láser. El láser se dirige a las células fotorreceptoras de la retina, lo que provoca la muerte celular y un proceso degenerativo. Este daño activa las células de la glía de Müller (MG), lo que lleva a su desdiferenciación en progenitores de células madre que ayudan en la regeneración de la retina.

Este video muestra el procedimiento de inyectar péptidos amiloides monoméricos en el prosencéfalo de un pez cebra adulto para generar toxicidad amiloide, imitando el daño neuronal observado en la enfermedad de...

Este video muestra el protocolo para medir la activación del receptor odorante en células transfectadas utilizando un biosensor de monofosfato de adenosina cíclico (cAMP) y detección de luminiscencia. El método se aplica para estudiar las interacciones receptor-ligando y las vías de señalización en las neuronas olfativas.

Este video muestra el procedimiento para inyectar péptidos de beta-amiloide, cloruro de aluminio y un factor de crecimiento neuroinflamatorio, que colectivamente ayuda en la formación de placa amiloide tóxica en la región del hipocampo. Esto causa deterioro de la memoria en la rata, característico de la enfermedad de Alzheimer.

Este video muestra la infusión estereotáxica precisa de beta amiloide en el giro dentado para establecer un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer. La determinación precisa de las coordenadas y la administración controlada de las proteínas beta amiloides dan como resultado la degradación neuronal, lo que interrumpe el procesamiento de la memoria y contribuye al desarrollo de la enfermedad de Alzheimer.

Este video muestra la inyección de fibrillas de alfa-sinucleína en un ratón para inducir neuroinflamación. Las fibrillas se inyectan por vía intraperitoneal en un ratón transgénico que expresa proteínas alfa-sinucleína mutadas. Al llegar al sistema nervioso central, las fibrillas entran en las neuronas e inducen la agregación de las proteínas mutadas. Los agregados se propagan a las neuronas vecinas, la microglía y los astrocitos. El reconocimiento de los agregados desencadena la microglía para...

Este video muestra el procedimiento para la obtención de imágenes in vivo de C. elegans que expresan proteínas similares a priones marcadas con proteína fluorescente roja. El protocolo consiste en inmovilizar nematodos en una almohadilla de agarosa para la microscopía confocal de lapso de tiempo, revelando la agregación y el transporte de proteínas dentro y entre las células. Esta técnica es crucial para estudiar la agregación de proteínas relacionadas con enfermedades neurodegenerativas.

Este video muestra el proceso de inyectar un vector viral en la rata substantia nigra para modelar la enfermedad de Parkinson. Describe los pasos para preparar la rata, la microinyección del vector viral en la sustancia nigra y el procedimiento de recuperación.

Este video explica el proceso de aislar y enriquecer agregados de proteínas insolubles en detergente a partir de tejido cerebral humano postmortem congelado. Demuestra los pasos clave, como la homogeneización, el tratamiento con detergente, la sonicación y la ultracentrifugación para separar y purificar los áridos insolubles. El paso final consiste en solubilizar los agregados en tampón de urea para su posterior análisis.

Este video muestra la obtención de imágenes y la cuantificación de agregados de proteínas en cerebros de Drosophila modificados genéticamente. Los cerebros se fijan, se lavan y se tratan con un agente antidecoloración antes de montarlos. Las imágenes se capturan con un microscopio confocal y se cuantifican para observar la transmisión de los agregados de proteínas mutantes.

Este video muestra un protocolo para investigar la colocalización de los receptores de orexina y cannabinoides en el tejido cerebral de pez cebra adulto con obesidad normal e inducida por la dieta (DIO) utilizando inmunofluorescencia.

Este video demuestra el proceso de cuantificación de la acumulación de alfa-sinucleína en neuronas embrionarias de dopamina de ratón pretratadas con fibrillas preformadas de alfa-sinucleína. Describe los pasos para fijar, teñir y cuantificar las neuronas dopaminérgicas que contienen agregados de alfa-sinucleína mediante inmunofluorescencia.

Este video demuestra cómo medir la actividad del proteasoma en diferentes compartimentos subcelulares de la amígdala lateral de cerebros de ratas condicionados por el miedo y de control utilizando un ensayo de péptidos fluorogénicos. El proteasoma escinde el sustrato del péptido fluorogénico, liberando moléculas fluorescentes, que se cuantifican utilizando un lector de placas para evaluar la actividad del proteasoma en las fracciones de proteínas nucleares y sinápticas. El aumento de la...

Este video muestra el proceso de inducción de discinesias inducidas por levodopa en un modelo de rata de Parkinson mediante la administración de levodopa junto con un inhibidor de la conversión de dopamina. Las inyecciones repetidas sobreestimulan las neuronas cerebrales, lo que resulta en una disfunción motora.

Este video muestra la inducción de dolor neuropático orofacial en un modelo de rata mediante la ligadura del nervio infraorbitario. Esto da como resultado daño a los nervios e inflamación, causando una señalización de dolor anormal e imitando las condiciones de dolor crónico, que se pueden usar para estudiar el ensayo de dolor orofacial.

Este video demuestra el método de detección de neuronas envejecidas en secciones de organoides corticales mediante tinción para la actividad de la beta-galactosidasa, que está elevada en las células senescentes. La enzima escinde un sustrato para producir un producto azul, seguido de una observación microscópica de las neuronas teñidas.

Este vídeo muestra la generación de un modelo de ratón de desmielinización focal utilizando una inyección de lisofosfatidilcolina (LPC) de dos puntos. El cráneo de un ratón anestesiado queda expuesto. Se determinan las coordenadas de inyección y se perfora un orificio para permitir las inyecciones de LPC en los sitios específicos. El LPC induce la desmielinización focal de las neuronas a través de la inflamación, mientras que una inyección de dos puntos garantiza su sostenibilidad.

Este video muestra el proceso de visualización de una interneurona llena de biocitina en una sección del hipocampo de una rata, destacando su identidad neuroquímica mediante el uso de anticuerpos específicos y microscopía de fluorescencia.

Este video muestra la tinción inmunohistoquímica para la proteína S-100 en secciones de biopsia por succión rectal. Las secciones recuperadas de antígeno se bloquean y se tratan con anticuerpos primarios, seguidos de anticuerpos secundarios contra S-100, un marcador de la enfermedad de Hirschsprung. Se añade sustrato cromogénico para teñir las células objetivo. Las muestras se deshidratan y se montan antes de visualizarlas bajo el microscopio.

Este video muestra el método para inducir la desmielinización en neuronas de la médula espinal de ratón utilizando inyecciones de lisolecitina, seguidas de remielinización a través de la migración y diferenciación de células precursoras de oligodendrocitos. El proceso perjudica y luego restaura gradualmente la transmisión de señales neuronales.

Este video muestra el proceso de transducción de células neuronales humanas con un lentivirus que codifica una proteína tau humana mutante marcada con proteína fluorescente amarilla (YFP) para estudiar la agregación de proteínas. Describe los pasos desde la entrada viral hasta la expresión mutante de tau, que culmina en la formación de agregados citoplasmáticos visibles de tau en las neuronas.

Este video muestra el marcaje de células neuronales con anticuerpos para complejos de cadenas respiratorias mitocondriales, proteínas asociadas al ADN mitocondrial y proteínas de la membrana externa mitocondrial, seguido de citometría de flujo para cuantificar sus niveles.

Este video muestra el procedimiento de medición de la actividad de la γ-secretasa en células humanas modificadas genéticamente utilizando un sistema inducible por tetraciclina. El proceso consiste en inducir la expresión génica de APP con tetraciclina, generar péptidos β amiloide y activar la producción de luciferasa. A continuación, se mide la bioluminiscencia resultante de la reacción luciferasa-sustrato, reflejando la actividad de la γ-secretasa.

Este protocolo describe el uso de la inmunohistoquímica para identificar regiones del locus coeruleus en secciones del cerebro de ratón. Al dirigirse a la dopamina β-hidroxilasa con anticuerpos marcados con fluoróforos verdes, las neuronas productoras de norepinefrina se visualizan como fluorescencia verde bajo un microscopio.

El video muestra el proceso de usar una sonda de microdiálisis para recolectar proteínas extracelulares del líquido intersticial (ISF) del cerebro de un ratón. Una sonda de microdiálisis, equipada con una membrana semipermeable cortada de alto peso molecular, se inserta en el cerebro de un ratón anestesiado a través de una cánula guía implantada. La sonda, conectada a bombas, permite que un tampón fisiológico perfunde el tejido cerebral y se mezcle con el ISF. Las proteínas en el ISF se...

Este video muestra el método de inducir estrés crónico en un ratón a través de la inmovilización repetida, lo que conduce a la liberación de corticosterona y reduce la actividad del receptor de glutamato en las neuronas, lo que resulta en un comportamiento similar a la depresión.

Este video muestra el procedimiento para preparar y tratar los hemílices cerebrales de rata con un péptido neurotóxico para imitar la neurodegeneración. El protocolo permite analizar los eventos neurodegenerativos comparando directamente los cortes control y tratados en el mismo plano anatómico.

Este video demuestra el uso de células ganglionares de la raíz dorsal transfectadas para estudiar la liberación de neurotransmisores estimulándolos con un agonista del receptor de neuropéptidos.

Este video demuestra la tinción inmunohistoquímica de fibras colinérgicas en el núcleo basal de la región de Meynert de secciones de cerebro de ratón. Las secciones se bloquean y se tratan con anticuerpos primarios contra la colina acetiltransferasa, seguidos de anticuerpos secundarios biotinilados. Se añaden complejos avidina-biotina-peroxidasa, que se unen a los anticuerpos secundarios, seguidos del sustrato cromogénico. A continuación, las secciones se deshidratan y se montan antes de...

Este video muestra la evaluación de la absorción de dopamina en sinaptosomas recolectados de cerebros de ratones. Describe los pasos para preparar los sinaptosomas para la absorción de dopamina a través de los transportadores de dopamina, tratarlos con concentraciones variables de dopamina radiomarcada, aislar los sinaptosomas y medir la radiactividad para cuantificar la absorción de dopamina.

Este video muestra el procedimiento para teñir cortes fijos de cerebro de rata que contienen interneuronas llenas de biocitina. El protocolo incluye la incubación con complejo avidina-biotina (ABC), la tinción con HRP y sustrato cromogénico, la preservación de las estructuras con tetróxido de osmio y la inclusión del tejido en resina para la obtención de imágenes.

Este video demuestra la detección de la síntesis de ARN del receptor de serotonina utilizando sondas de oligonucleótidos en tejido cerebral de rata afectado por el síndrome de serotonina. El protocolo incluye pretratamiento de tejidos, hibridación de sondas y detección enzimática para visualizar y cuantificar la expresión del ARN del receptor de serotonina bajo un microscopio.

En este vídeo, se utilizó un trozo de cerebro cerebeloso de ratón para investigar las interacciones sinápticas entre las fibras paralelas, las fibras trepadoras y las células de Purkinje, que son esenciales para el control motor. La estimulación de las fibras trepadoras indujo una depresión a largo plazo (LTD) en las células de Purkinje, debilitando la fuerza sináptica y dando lugar a una respuesta reducida a la estimulación de las fibras paralelas.

Este video muestra la tinción de inmunofluorescencia de un cerebro transgénico de Drosophila para la obtención de imágenes de células gliales de una sola célula. El cerebro expresa proteínas dirigidas a la membrana fusionadas con diferentes combinaciones de epítopos antigénicos bajo el control de un sistema de recombinasa específico de la glía. Los cerebros aislados y fijos se tiñen con anticuerpos primarios específicos para los epítopos antigénicos, seguidos de anticuerpos secundarios...

Este video muestra un procedimiento quirúrgico guiado estereotácticamente para ablar la corteza auditiva en una rata. Los pasos incluyen la identificación de puntos de referencia anatómicos en una rata anestesiada asegurada en un marco estereotáctico, la creación de una ventana en el cráneo por encima de la corteza auditiva, la aspiración de las capas corticales y la prestación de cuidados postoperatorios para evaluar el impacto de la ablación en el procesamiento del sonido.

En este video, describimos el procedimiento para realizar la tinción de fluorescencia utilizando microscopía de fluorescencia para demostrar la tinción de faloidina de células de cresta neural cultivadas en hidrogeles de diferente rigidez para visualizar y analizar la organización del citoesqueleto.

Este video muestra la reticulación de proteínas de superficie neuronal usando suberato de bis-sulfosuccinimidil o BS3. El cerebro de ratón aislado y enfriado se secciona coronalmente. La región deseada se extrae de las secciones, se pica y se trata con BS3. BS3 se entrecruza con proteínas de superficie como los receptores GABA, dejando inalteradas las proteínas internas. La reacción se apaga con glicina antes de procesar las muestras para su posterior análisis.

El video muestra una técnica para medir la absorción de glucosa en las neuronas motoras de las larvas de Drosophila utilizando un sensor de glucosa intracelular basado en la transferencia de energía por resonancia fluorescente (FRET). Después de diseccionar las larvas para exponer el cordón nervioso ventral, las neuronas motoras se visualizan a través de la fluorescencia emitida por el fluoróforo donante del sensor. Cuando se estimula con glucosa, el FRET entre los fluoróforos donantes y...

Este video muestra el procedimiento para inmunoteñir una sección fija de tejido cerebral de ratón con astrocitos marcados con fluorescencia utilizando anticuerpos primarios y secundarios y capturar las imágenes de los astrocitos teñidos a través de microscopía confocal.

Este vídeo muestra cómo aislar células de Purkinje de un tejido cerebeloso post-mortem humano mediante microdisección por captura láser.

Este video muestra un protocolo detallado paso a paso para preparar secciones de tejido cerebral de ratón congelado para análisis posteriores.

Este video demuestra el desarrollo de un modelo de cultivo de órganos proinflamatorios y degenerativos para la enfermedad del disco intervertebral (IVD) en etapa temprana utilizando TNF-α. Describe el procedimiento para inyectar TNF-α en el disco intervertebral y explica los mecanismos a través de los cuales el TNF-α induce la inflamación y la degradación del IVD.

Este video muestra la disociación de tejido cerebral de rata congelado en una suspensión de una sola célula utilizando digestión enzimática y trituración mecánica. Las células preparadas se fijan y permeabilizan con etanol para aplicaciones posteriores como la citometría de flujo o el análisis de expresión génica.

El vídeo muestra el análisis del estado de palmitoilación de proteínas de la membrana celular aisladas de tejido cerebral de ratón. El proceso consiste en exponer las cisteínas no palmitoiladas y bloquearlas, y luego usar un polímero que se une a las cisteínas palmitoiladas, lo que ayuda a evaluar el estado de palmitoilación de las proteínas aisladas.

Este video muestra un método para fabricar microperlas de polímero que encapsulan células neurotóxicas secretoras de beta amiloide. La suspensión de célula y polímero se procesa a través de un dispositivo de fabricación de microperlas, con la gelificación del polímero lograda mediante reticulación de calcio, formando microperlas esféricas alrededor de las células. El polímero permite la proliferación celular a la vez que permite la liberación controlada y a largo plazo de beta amiloide,...

El video muestra un procedimiento paso a paso para diseccionar simétricamente un cerebro humano postmortem fijo, preparando bloques de tejido más pequeños para su posterior análisis.

Este video muestra el procedimiento para evaluar la capacidad de retención de calcio mitocondrial mediante el monitoreo de cambios en tiempo real en la fluorescencia a medida que las mitocondrias absorben calcio. Este ensayo es útil para estudiar la función mitocondrial y los procesos relacionados con el calcio, incluida la apoptosis y las enfermedades neurodegenerativas.

Este video demuestra el efecto de la infusión continua de medicamentos en el cerebro del ratón sobre los niveles de glucosa en la sangre. El metabolismo de la glucosa se evalúa mediante la recolección de sangre de la cola de un ratón en ayunas y la medición de los niveles de glucosa antes y después de la administración oral de glucosa. La tolerancia a la insulina se evalúa inyectando insulina en el ratón, con niveles de glucosa registrados a intervalos específicos.

En este video, una rata anestesiada se somete a un procedimiento ocular en el que se inyectan perlas magnéticas en la cámara anterior bajo un campo magnético para bloquear el ángulo iridocorneal. Esta obstrucción obstruye la malla trabecular, impidiendo el drenaje acuoso del humor y provocando un aumento de la presión intraocular, dañando las células ganglionares de la retina y el nervio óptico. Esto desarrolla una afección similar al glaucoma.

Fuente: Kummari, E., et. al., Microdisección de captura láser: una demostración del aislamiento de neuronas dopaminérgicas individuales y toda el área tegmental ventral., J. Vis. Exp. (2015)En este video, demostramos el protocolo de inmunohistoquímica para las neuronas de dopamina en secciones de tejido cerebral para la posterior microdisección de captura con láser.

Fuente: Bennett, S. A., et al., Caracterización de las alteraciones de la modificación postraduccional de histonas en modelos de proteinopatía neurodegenerativa de levaduras. J. Vis. Exp. (2019). Este video muestra el procedimiento de evaluación de las modificaciones de histonas en células de levadura que sobreexpresan proteínas neurodegenerativas. Los pasos incluyen lisis celular, centrifugación, electroforesis, transferencia de membrana y detección de histonas modificadas basada en...

Fuente: Yan, Z., et al. Evaluación del efecto antidepresivo de Xiaoyaosan en ratones con estrés crónico. J. Vis. Exp. (2019). El video muestra el proceso de establecer un modelo de ratón de depresión crónica inducida por el estrés y evaluar los comportamientos depresivos. La aplicación crónica de varios factores estresantes desencadena la liberación de corticosterona, lo que conduce a una sobreexcitación neuronal y finalmente a la muerte neuronal, lo que resulta en síntomas similares a la...

Fuente: Bétemps, D., et al., Detección de α-sinucleína asociada a enfermedades mediante ELISA mejorado en el cerebro de ratones transgénicos que sobreexpresan la α-sinucleína mutada A53T humana. J. Vis. Exp. (2015). Este video muestra el procedimiento para detectar la proteína α-sinucleína asociada a enfermedades neurodegenerativas en tejido cerebral de ratones transgénicos utilizando ELISA. Los pasos incluyen la homogeneización de tejidos, la centrifugación y la detección ELISA de la proteína...

Fuente: Wulf, M., et.al. Protocolo basado en microdisección láser para el análisis LC-MS/MS del perfil proteómico de gránulos de neuromelanina. J. Vis. Exp. (2021).Este video muestra el análisis de muestras de péptidos de gránulos de neuromelanina (NMG) aislados de tejido cerebral postmortem humano. Los péptidos se separan primero mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y luego se analizan mediante espectrometría de masas para determinar sus relaciones masa-carga (m/z). Los...

Fuente: Zhi, L. et al., Medición de la tasa de consumo de oxígeno en cortes estriados agudos de ratones adultos. J. Vis. Exp. (2022). Este video demuestra cómo medir la tasa de consumo de oxígeno mitocondrial (OCR) en cortes de cerebro estriado de ratón. En él se detallan los pasos para preparar la placa de tejido y el cartucho del sensor, cargarlos en el analizador de flujo, y se explican los procesos celulares que subyacen a los patrones de OCR.

Fuente: Josiah, S. S., et al. Estudio de las funciones y actividades del cotransportador neuronal de K-Cl KCC2 mediante Western blot. J. Vis. exp. (2022). El video muestra los pasos para detectar y cuantificar la proteína cotransportadora 2 de cloruro de potasio fosforilado (KCC2) en un lisado celular. Este proceso implica inmunoprecipitación para aislar KCC2 fosforilada y quimioluminiscencia para cuantificar la proteína aislada.

Fuente: Lani-Louzada, R., et al. Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores. J. Vis. Exp. (2022). Este video demuestra la cuantificación de células ganglionares de la retina de retinas de rata fijadas químicamente y sometidas a la cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal. El proceso incluye permeabilización, tinción de anticuerpos y contratinción nuclear, seguida de la visualización bajo un microscopio de...

Fuente: Jensen, V. N., et al. Medición repetida de la actividad muscular respiratoria y la ventilación en modelos murinos de enfermedad neuromuscular. J. Vis. Exp. (2017). Este video muestra el método para registrar señales simultáneas de pletismografía y electromiografía en un modelo de ratón ELA que se mueve libremente. El procedimiento implica el uso de electrodos implantados y un transmisor para capturar la actividad muscular, junto con una cámara de pletismografía para monitorear los...

Fuente: Jiang, X., et al. Inducción y evaluación de un modelo murino de miopía experimental. J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra un procedimiento para inducir miopía en un ratón a través de la instalación de un marco de lente personalizado. La montura se fija al cráneo expuesto con adhesivo dental y se insertan lentes cóncavas para desplazar el punto focal detrás de la retina. Esta configuración estimula la elongación del globo ocular que conduce a la miopía.

Fuente: Jolly, S., et.al. Combinación de hibridación de doble fluorescencia in situ con inmunomarcaje para la detección de la expresión de tres genes en secciones de cerebro de ratón. J. Vis. Exp. (2016). Este video demuestra el uso de la hibridación in situ de doble fluorescencia para visualizar la expresión de dos dianas de ARN en secciones del cerebro de ratón. El protocolo implica la detección secuencial de ARN mediante sondas marcadas con isotiocianato de fluoresceína y digoxigenina,...

Fuente: Baleriola, J., et. al., Detección de ARNm localizados axonalmente en secciones cerebrales mediante hibridación in situ de alta resolución. J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra la detección de ARNm dentro de axones colinérgicos en cortes fijos de hipocampo de ratón utilizando hibridación fluorescente in situ y tinción de anticuerpos. La microscopía de fluorescencia revela la localización espacial de los ARNm marcados con sonda y la colina acetiltransferasa en las neuronas...

Fuente: Zhang, J., et al. Análisis cuantitativo de inmunogold de alta resolución de receptores de membrana en sinapsis de cinta de retina. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra una técnica de microscopía electrónica para visualizar la localización del receptor de neurotransmisores en las sinapsis de la retina. Las secciones de la retina contienen células ganglionares de la retina que exhiben receptores de neurotransmisores unidos a la membrana y están marcadas con la subunidad B de la toxina...

Fuente: de March, C. A. et. al., Monitoreo in vitro en tiempo real de la activación del receptor de odorante por un odorante en la fase de vapor. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra el método para monitorear la activación en tiempo real de los receptores de odorantes en células recombinantes de mamíferos utilizando la medición de luminiscencia. La unión de odorantes desencadena la activación de la proteína G y la producción de AMPc, activando las proteínas glosensoras que emiten...

Fuente: Alluri, H., et al. Privación y reoxigenación de oxígeno-glucosa como modelo de lesión in vitro por isquemia-reperfusión para el estudio de la disfunción de la barrera hematoencefálica. J. Vis. Exp. (2015). El video demuestra la localización fluorescente de proteínas de unión estrecha y fibras de estrés en células endoteliales microvasculares del cerebro de rata (RBMEC). En la monocapa sometida a estrés, se utilizan anticuerpos marcados con fluorescencia para marcar las proteínas de...

Fuente: Eid, L. y Parent, M. Preparación de tejido cerebral de primates no humanos para inmunohistoquímica previa a la inclusión y microscopía electrónica. J. Vis. Exp. (2017). Este video muestra la preparación de tejido cerebral de primates no humanos fijado en aldehído utilizando inmunohistoquímica previa a la inclusión para microscopía electrónica. Describe los pasos para el inmunomarcaje de una proteína neuronal específica, seguido de una reacción de peroxidasa que produce un precipitado...

Fuente: Evilsizor, M. N., et. al., Primer para inmunohistoquímica en tejido cerebral de rata crioseccionado: ejemplo de tinción para microglía y neuronas. J. Vis. Exp. (2015)Este video muestra un procedimiento de tinción inmunohistoquímica paso a paso en tejido cerebral de rata crioseccionado para visualizar la disposición espacial de la microglía y las neuronas.

Fuente: Kirchner, K.N., et al., Un método de limpieza de tejido hidrofóbico para el tejido cerebral de rata. J. Vis. Exp. (2020). Este video muestra el método de limpieza de tejido hidrofóbico de una muestra de tejido cerebral de rata. La muestra se deshidrata secuencialmente en metanol, se trata con una mezcla de diclorometano y metanol para disolver lípidos y pigmentos, y se transfiere al éter de dibencilo para una limpieza completa del tejido, lo que permite obtener imágenes detalladas sin...

Para detectar estas bacterias, tome una sección de cerebro humano desparafinado, rehidratado e infectado con bacterias infectadas con antígenos proteicos expuestos y fosfatasa endógena inactivada.

El virus infecta las neuronas piramidales en la corteza cerebral, y las proteínas virales expresadas se localizan dentro de estructuras granulares intracitoplasmáticas conocidas como cuerpos de inclusión.

Lavar para eliminar la parafina, luego rehidratar el tejido usando concentraciones de alcohol decrecientes.

Este video muestra el aislamiento de proteínas intracelulares y de superficie celular a partir de un cultivo de astrocitos. El cultivo de astrocitos se coloca en hielo para inhibir la endocitosis y, a continuación, las proteínas de la superficie celular se marcan con un reactivo de biotinilación. Las células se lisan para liberar las proteínas biotiniladas de la superficie celular y las proteínas intracelulares no biotiniladas. Por último, las perlas recubiertas de estreptavidina se utilizan...

Este video muestra el proceso de inyección intracerebroventricular para estudiar la distribución del citomegalovirus murino (MCMV) en el cerebro de ratón neonatal. El MCMV, diseñado para expresar una proteína verde fluorescente mejorada (EGFP) para mayor visibilidad, se inyecta en el ventrículo lateral del cerebro de un cachorro de ratón. El virus inyectado circula a través del líquido cefalorraquídeo, infectando las células de la región periventricular, incluida la zona marginal, el plexo...

Este video muestra el establecimiento de un modelo in vitro de infección por el virus del Zika en un cerebro en desarrollo. Los organoides cerebrales humanos que contienen rosetas de células madre, células progenitoras neurales (NPC) y neuronas están infectados con el virus del Zika. El virus infecta a las NPC y desencadena la apoptosis, interrumpiendo el desarrollo de los organoides.

El video muestra la microinyección de lipopolisacáridos (LPS) en el cerebro de larvas de pez cebra para inducir neuroinflamación. Las larvas se colocan en una placa revestida de agarosa, la aguja se inserta en los ventrículos cerebrales y se inyecta el LPS. El LPS inyectado desencadena una respuesta inmunitaria que conduce a la neuroinflamación.

Este video demuestra la evaluación de la salud mitocondrial en astrocitos modificados genéticamente, que expresan una proteína fluorescente dentro de sus mitocondrias. La proteína ayuda a rastrear los cambios en la salud mitocondrial a medida que su fluorescencia cambia de verde a rojo, lo que indica estrés o daño. Las imágenes se capturan y analizan utilizando varios parámetros.

Este video muestra el procedimiento de inyectar virus quiméricos del VIH en la corteza del cerebro de una rata, donde el ARN del virus se integra en el genoma del huésped, se replica y se propaga para establecer una infección activa por el VIH en el modelo experimental.

Este video muestra la generación de un modelo de ratón con una infección en el SNC. A una cría lactante se le inyecta el virus tanto por vía intracraneal como intraperitoneal. El virus se propaga, infectando el SNC causando la muerte de las células neuronales y la inflamación. El cachorro es evaluado para detectar síntomas de infección a medida que la enfermedad progresa.

Este video muestra la generación de neuroinflamación en un modelo de ratón. Se toma un ratón anestesiado con microheridas y se aplica un inóculo del virus de la pseudorrabia (PRV) en las heridas. El virus infecta los nervios periféricos, se propaga a los ganglios de la raíz dorsal (DRG) e infecta aún más la médula espinal y el cerebro. La infección de las neuronas del sistema nervioso provoca una respuesta inmunitaria que induce daño neuronal, lo que conduce a la neuroinflamación.

El video muestra la inyección intracerebral de suspensión del virus del Zika en un ratón adulto para inducir neurodegeneración. Un ratón anestesiado se asegura en un marco estereotáxico y se perfora un orificio en el cráneo expuesto para la inyección. Se inyecta una suspensión del virus del Zika en el tejido cerebral. La infección viral causa inflamación, lo que lleva a la neurodegeneración.

Este video muestra la cuantificación de la carga bacteriana infecciosa del cerebro de ratón perfundido infectado con Listeria monocytogenes.

Este video muestra un método para estudiar la permeabilidad a través de un modelo de barrera hematoencefálica (BBB) in vitro utilizando astrocitos y células endoteliales en un inserto de membrana, con FITC libre y ferritina cargada con FITC. La FITC-ferritina se unió a los receptores de las células endoteliales y cruzó la barrera de la membrana hacia la cámara inferior, mientras que la FITC libre mostró una permeabilidad restringida y permaneció en la cámara superior.

Este video muestra un procedimiento para infectar células madre neurales fetales humanas con el virus del Zika. Las células infectadas se pueden utilizar para estudios posteriores.

Este video muestra un modelo in vitro para estudiar patógenos que atraviesan la barrera hematoencefálica (BBB). Las células endoteliales microvasculares, que expresan uniones estrechas, forman una capa endotelial en la cámara superior, mientras que las neuronas, los astrocitos y la microglía representan el parénquima cerebral en la cámara inferior, separadas por una membrana porosa. La infección viral en el modelo BBB imita el paso del patógeno de la sangre al cerebro. Al introducir un virus...

Fuente: Funes, S., et. al., Células similares a la microglía humana: diferenciación de células madre pluripotentes inducidas y ensayo de fagocitosis de células vivas in vitro utilizando sinaptosomas humanos. J. Vis. Exp. (2022)Este video muestra un ensayo para estudiar la capacidad fagocítica de células similares a la microglía utilizando sinaptosomas marcados con colorantes fluorescentes sensibles al pH.

Sumerge el tejido en xileno para disolver la parafina.

Inyecte por vía intravenosa albúmina marcada con fluoróforos, que atraviesa la barrera hematoencefálica dañada y llega al cerebro.

El tejido muestra fibrillas amiloides y agregados de proteínas anormales en las paredes de los vasos cerebrales, que son indicadores clave de trastornos neurológicos.

La MCCH se caracteriza por una reducción del flujo sanguíneo al cerebro. Esto limita el suministro de oxígeno y nutrientes a la capa de células endoteliales de los vasos sanguíneos cerebrales, dañando las células.

Suspenda la mezcla celular en una matriz extracelular o solución de ECM.

Haga una incisión en el cuello para exponer y ligar sin apretar las arterias carótidas comunes bilaterales.

Este video muestra el método para inducir encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) inyectando péptidos derivados de mielina con un adyuvante para activar las células T autorreactivas, que migran al cerebro. La toxina de la tos ferina se administra para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que estas células T y otras células inmunitarias ingresen al cerebro. Estas células inmunitarias causan desmielinización, lo que conduce a una transmisión nerviosa...

Este vídeo muestra un procedimiento para evaluar la alteración de la barrera hematoencefálica en un modelo de ratón EAE. Los tintes fluorescentes de diferentes tamaños se inyectan retroorbitalmente y circulan a través de los vasos sanguíneos del cerebro. El tinte más pequeño se filtra a través de los espacios en el tejido cerebral, mientras que el tinte más grande ingresa solo si la interrupción es grave, lo que se correlaciona con el grado del daño de la barrera.

Este video muestra un procedimiento para inducir daño tisular o infarto en la protuberancia de una rata anestesiada utilizando estimulación eléctrica.

En este video, los embriones fertilizados de pez cebra se descorionan bajo un microscopio estereoscópico y luego se exponen a un inhibidor de la síntesis de colesterol, lo que lleva al desarrollo de rupturas de vasos sanguíneos y hemorragias cerebrales en las larvas. Las larvas hemorrágicas, identificables por manchas rojas distintivas, se separan posteriormente bajo un microscopio para su posterior análisis.

Este video muestra el proceso de inducción de la ruptura de la barrera hematoencefálica (BBB) y microhemorragias cerebrales en un modelo de rata que utiliza lipopolisacárido (LPS). Destaca la secuencia de respuestas inmunitarias que conducen a un aumento de la permeabilidad de la BBB y al posterior daño del tejido cerebral.

Este video muestra un ensayo para detectar microhemorragias cerebrales (CMHs) en un modelo de rata. Las CMH son hemorragias cerebrales debidas a la alteración de la barrera hematoencefálica, identificadas por la fuga de glóbulos rojos (RBC). En un modelo de rata, el tejido cerebral fijo se crioprotege, se secciona y se tiñe con hematoxilina-eosina para los glóbulos rojos, lo que permite la visualización microscópica de las CMH. Los glóbulos rojos con fugas aparecen como rojo-anaranjado bajo el...

El video muestra el procedimiento para crear un modelo de ratón para estudiar la lesión cerebral hipóxico-isquémica neonatal. Describe los pasos para inducir quirúrgicamente la isquemia y someter al animal a hipoxia para exacerbar el daño cerebral. Por último, se muestra cómo evaluar las lesiones cerebrales resultantes, asegurando que el modelo de ratón esté preparado para futuras investigaciones científicas.

Este video demuestra cómo caracterizar el espacio extracelular en un corte de cerebro mediante el uso de microelectrodos selectivos de iones e iontoforesis para medir y comparar señales eléctricas. Este proceso ayuda a determinar el volumen, la fracción y el grado de torsión del espacio.

En este video, una matriz de electrodos múltiples (MEA) recubierta con glutamato oxidasa se implanta en el tejido cerebral de un ratón anestesiado. La solución de glutamato se inyecta en el espacio extracelular donde el MEA detecta los niveles de glutamato, lo que permite el seguimiento en tiempo real de la absorción de glutamato por parte de los astrocitos.

En este video, una cría de ratón modificada genéticamente portadora del gen Ccm2 flanqueada por sitios loxP y Cre recombinasa fusionada con un receptor de estrógeno se utiliza para inducir malformaciones cavernosas cerebrales (MCC). La administración de 4-hidroxitamoxifeno activa Cre en las células endoteliales, lo que conduce a la deleción de Ccm2 y la formación de CCM en el cerebro.

Este video muestra el procedimiento para aislar células cerebrales y células inmunitarias infiltradas de tejidos cerebrales de ratones isquémicos mediante digestión enzimática, seguido de la eliminación de restos celulares y mielina por centrifugación en gradiente de densidad, para estudiar las respuestas inflamatorias en la investigación de accidentes cerebrovasculares.

El video muestra la inducción de hemorragia subaracnoidea a través de la perforación endovascular en un modelo de ratón. Se realiza una incisión en la región del cuello del ratón anestesiado para acceder a la arteria carótida común y su bifurcación. Se inserta un filamento a través de las arterias para perforar una rama de la arteria intracraneal, induciendo una hemorragia subaracnoidea.

Este video muestra un método para generar un modelo de hemorragia intraventricular neonatal en ratas. En este procedimiento, se inyecta hemoglobina a una cría de rata anestesiada en el ventrículo lateral del cerebro. La hemoglobina provoca estrés oxidativo y libera hemo, simulando una hemorragia intraventricular. El daño resultante a los tejidos cerebrales, impulsado por especies reactivas de oxígeno y citocinas inflamatorias, conduce al agrandamiento ventricular, una consecuencia común de la...

Este video muestra el procedimiento de realizar una oclusión permanente de la arteria cerebral media distal, o MCAO, con la arteria carótida común, o ligadura de CCA, en ratas envejecidas para modelar un accidente cerebrovascular isquémico. Esto bloquea el flujo sanguíneo al cerebro, lo que conduce a la muerte neuronal y genera un modelo para estudiar los mecanismos del accidente cerebrovascular y los posibles tratamientos.

Este video muestra el procedimiento para establecer un modelo de rata con hemorragia subaracnoidea. A una rata anestesiada se le implantan sondas para medir la presión intracraneal y el flujo sanguíneo cerebral. Se identifica el sitio objetivo y se inserta la aguja en una posición prequiasmática. A continuación, se inyecta sangre autóloga en el espacio subaracnoideo, aumentando la presión intracraneal y disminuyendo el flujo sanguíneo cerebral, estableciendo el modelo.

Este video muestra una investigación experimental de la transmigración de linfocitos a través de un modelo de endotelio de barrera hematoencefálica (BBB). Se genera una monocapa de células endoteliales microvasculares del cerebro humano (HBMEC) in vitro, y se añaden a la monocapa células mononucleares de sangre periférica (PBMC) que contienen linfocitos. A continuación, las células se incuban para permitir la transmigración de los linfocitos, y las células migradas se cuantifican mediante...

Este video muestra la evaluación de la zona de infarto y el edema cerebral en cortes de cerebro de ratas sometidas a oclusión de la arteria cerebral media. Las áreas infartadas se identifican mediante tinción redox, mientras que un filtro azul y una función de umbral en el software de análisis de imágenes cuantifican la zona de infarto y el edema en el hemisferio afectado.

Este video muestra un método para evaluar la resistencia eléctrica transendotelial (TEER) en células endoteliales microvasculares del cerebro de ratón in vitro. Un valor alto de TEER indica uniones de células endoteliales intactas, mientras que la adición de células T activadas reduce el valor de TEER, lo que refleja la interrupción de la barrera de unión.

Este video muestra un procedimiento para la denervación simpática de la arteria renal en un modelo de ratón hipertensivo inducido por angiotensina II, utilizando fenol para interrumpir la función nerviosa simpática y reducir la presión arterial.

Este video muestra el proceso de inducción de un accidente cerebrovascular isquémico en un modelo de rata mediante la oclusión de la arteria cerebral media (ACM) con un perno roscado. El procedimiento consiste en ligar las arterias carótidas, insertar un perno roscado en la arteria carótida externa y bloquear el flujo sanguíneo desde la MCA al cerebro, lo que provoca la muerte neuronal e imita un accidente cerebrovascular isquémico.

Este video muestra el procedimiento de replicar un accidente cerebrovascular trombótico en un modelo de ratón mediante el bloqueo de la arteria carótida común derecha y la exposición del ratón a un entorno con poco oxígeno. Este proceso reduce el flujo de sangre y oxígeno al cerebro, lo que provoca la formación de coágulos sanguíneos y daño cerebral.

Este video demuestra la técnica precisa para inducir un accidente cerebrovascular de materia blanca en un ratón anestesiado mediante la inyección de un inhibidor de óxido nítrico en coordenadas cerebrales específicas dentro de la materia blanca. Esto conduce a la constricción de los vasos sanguíneos y a la inhibición del suministro de sangre, lo que provoca daño neuronal y un accidente cerebrovascular.

Fuente: Wanderer, S., et al. Modelo de aneurisma de bifurcación microquirúrgica con bolsa arterial en conejo. J. Vis. Exp. (2020)Este video muestra la creación de un modelo experimental de aneurisma en un conejo utilizando una bolsa de recipiente tratada con elastasa. Después de extirpar un segmento del CCA derecho, la bolsa se trata con elastasa y luego se sutura al CCA izquierdo para restaurar el flujo sanguíneo. La tensión resultante en las paredes debilitadas de la bolsa induce la formación...

Fuente: Sharma, T. P., et al., Modelo de sistema autónomo translaminar para la modulación de la presión intraocular e intracraneal en segmentos posteriores de donantes humanos. J. Vis. Exp. (2020). Este video muestra el procedimiento de preparación de un ojo humano para estudiar los efectos de la presión translaminar en la señalización de las células ganglionares de la retina mediante la simulación de presiones intraoculares e intracraneales en un sistema autónomo translaminar.

Fuente: Lani-Louzada, R., et al., Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra la inducción y monitorización de la presión intraocular (PIO) elevada en un modelo de rata. El proceso consiste en cauterizar los vasos sanguíneos limbales, lo que provoca la oclusión de los vasos y una PIO elevada. A continuación, se permite que la rata se recupere y la PIO se monitoriza regularmente tanto...

Fuente: Jungen, C., et al. Impacto de las neuronas intracardíacas en la electrofisiología cardíaca y la arritmogénesis en un sistema Langendorff Ex vivo. J. Vis. Exp. (2018). El video muestra una técnica ex vivo para estimular el sistema nervioso intracardíaco para evaluar la susceptibilidad del corazón a la arritmia. Usando un aparato de perfusión, un corazón de ratón aislado se perfunde con un tampón oxigenado. A continuación, se estimula el sistema nervioso intracardíaco a alta frecuencia...

Fuente: Hakim, M. A. et al., Aislamiento y análisis funcional del endotelio arteriolar del parénquima cerebral de ratón. J. Vis. Exp. (2022). Este video muestra el análisis funcional de un tubo endotelial arteriolar aislado del cerebro de un ratón. Describe los pasos para medir los niveles de calcio intracelular y el potencial de membrana, tanto al inicio como en respuesta a la estimulación farmacológica.

Fuente: Tang, X. et. al., Hemorragia Pontina Masiva por Inyección Dual de Sangre Autóloga. J. Vis. Exp. (2021)Este protocolo describe la infusión controlada de sangre autóloga en la región pontina del cerebro de una rata para modelar una hemorragia pontina masiva. El propósito es simular una hemorragia cerebral localizada mediante el aumento de la presión localizada.

Fuente: Alluri, H., et.al. Privación y reoxigenación de oxígeno-glucosa como modelo de lesión in vitro por isquemia-reperfusión para el estudio de la disfunción de la barrera hematoencefálica. J. Vis. Exp. (2015).El video demuestra el impacto de la privación de oxígeno-glucosa y la posterior reoxigenación en las células endoteliales microvasculares del cerebro de rata (RBMEC) mediante la simulación de condiciones hipóxicas y de privación de nutrientes. Estas condiciones dan lugar a la depleción...

Fuente: Gucciardo, E., et. al., Un modelo de cultivo de tejidos ex vivo para las complicaciones fibrovasculares en la retinopatía diabética proliferativa. J. Vis. Exp. (2019)Este video detalla un protocolo de inmunotinción para cultivos ex vivo de tejido fibrovascular incrustado en gel de fibrina. Esto permite una visualización detallada de los cambios vasculares asociados con la retinopatía diabética...

Fuente: Talley Watts, L., et al. Fototrombosis de Bengala Rosa por imágenes ópticas confocales in vivo: un modelo de accidente cerebrovascular de un solo vaso. J. Vis. Exp. (2015)Este video muestra una técnica para inducir la formación de coágulos de sangre en el cerebro de un ratón. Un ratón anestesiado con una ventana craneal y un cráneo adelgazado sufre fototrombosis a través de la activación de un tinte fotosensible utilizando luz de alta intensidad. Este proceso genera especies reactivas...

Fuente: Kuts, R. et al. Lesión cerebral inducida por láser en la corteza motora de ratas. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la evaluación de la integridad de la barrera hematoencefálica (BBB) después de una lesión cerebral inducida por láser en ratas. Se inyecta un tinte de rastreo en la vena de la cola, lo que permite que circule al cerebro y se filtre en el tejido a través de la BHE dañada. A continuación, se extrae el cerebro y se procesa para liberar el tinte. La intensidad de...

Los astrocitos secretan moléculas de señalización que mejoran la maduración y diferenciación de las células madre en neuronas y astrocitos.

Este video muestra un método para probar la migración de interneuronas en respuesta a señales quimioatractivas de las células endoteliales periventriculares (PVECs). Las interneuronas se colocan en un compartimento central, con PVEC y células de control a ambos lados. El aumento de la migración hacia las PVEC indica una respuesta positiva a sus señales quimioatractivas.

Este video demuestra la tinción de inmunofluorescencia de cortes de organoides cerebelosos para identificar antígenos diana específicos expresados en varias neuronas cerebelosas, que son indicativos de la maduración de organoides.

Este video demuestra el método de identificación de neuronas de un cultivo mixto de neuronas granulosas cerebelosas y células gliales utilizando tinción dual con diacetato de fluoresceína (FDA) y yoduro de propidio (PI), donde las neuronas vivas aparecen verdes y las neuronas muertas aparecen rojas.

Este video muestra un protocolo detallado de inmunotinción para visualizar defectos fenotípicos en los cuerpos de hongos de cerebros de Drosophila mutantes. El protocolo consiste en el uso de anticuerpos contra Fas2, una proteína implicada en la guía axonal que facilita el correcto desarrollo morfológico y funcional del cuerpo del hongo.

Este video muestra el procedimiento para teñir células madre neurales recién proliferadas en secciones de tejido cerebral utilizando la incorporación de EdU, seguido de inmunofluorescencia para visualizar proteínas específicas, mejorando la comprensión de la dinámica celular y la proliferación.

Este video demuestra la tinción por inmunofluorescencia de criosecciones de tejidos craneofaciales embrionarios de ratón, utilizando microscopía de fluorescencia para evaluar la expresión de marcadores nucleares y determinar la proliferación celular y la actividad de señalización.

Este video demuestra cómo las vesículas neuronales se marcan con proteínas fluorescentes específicas para visualizar su movimiento. Primero, un plásmido que codifica para una proteína fluorescente se incuba con un agente de transfección y luego se introduce en un cultivo de neuronas. Posteriormente, se adquieren imágenes de las neuronas y se analizan para rastrear el movimiento de las vesículas.

Este video muestra la medición de la secreción de ácido retinoico (AR) de las células de la neurosfera utilizando células reporteras de AR. Describe los pasos involucrados en el cocultivo de células de la neurosfera con células reporteras de AR y la realización de un ensayo colorimétrico de AR para medir los niveles de AR.

Este video demuestra la inmunotinción del tracto gastrointestinal murino embrionario para visualizar y analizar la distribución de la población neuronal utilizando inmunofluorescencia y microscopía confocal.

Este video muestra el marcaje viral y el trasplante de células de eminencia ganglionar medial (MGE) para estudios in vivo. Describe los pasos involucrados en la transducción de células MGE con un reportero viral, el trasplante de estas células transducidas a la corteza de una cría de ratón y la habilitación de la expresión de reporteros en subtipos específicos de interneuronas.

Este video muestra el aislamiento de núcleos ricos en receptores de oxitocina del cerebro de rata neonatal. El corte coronal, seguido de la identificación y el punzonado preciso de los núcleos cerebrales ricos en receptores de oxitocina, permite la extracción eficaz de los núcleos ricos en receptores de oxitocina para su posterior análisis.

Fuente: Pericoli, G. et. al., Ensayos de inmunocitoquímica de células 3D vivas del glioma difuso de línea media pediátrico. J. Vis. Exp. (2021)Este video muestra imágenes de células vivas para observar la migración de células del glioma difuso de línea media pediátrico mediante el marcaje inmunohistoquímico con anticuerpos anti-CD44.

Fuente: Jantzie, L. L., et. al. Modelado de la encefalopatía del prematuro mediante hipoxia-isquemia prenatal con lipopolisacárido intraamniótico en ratas. J. Vis. Exp. (2015)Este video muestra un protocolo para inducir condiciones hipóxico-isquémicas e inflamatorias en ratas fetales mediante la restricción del flujo sanguíneo uterino y la inyección de LPS, modelando la neuroinflamación y el desarrollo cerebral interrumpido relevante para los estudios de nacimientos prematuros.

Fuente: Larpthaveesarp, A., et. al. Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media del accidente cerebrovascular neonatal en ratas P10. J. vis. exp. (2017)Este video muestra el establecimiento del modelo de oclusión de la arteria cerebral media en una cría de rata. La arteria carótida interna (ACI) queda expuesta y se asegura una ligadura para restringir el flujo sanguíneo. Se inserta un ocluso a través de la ICA para llegar a la arteria cerebral media. A continuación, se permite...

La enfermedad hace que las células inmunitarias autorreactivas ataquen a las proteínas de mielina, degradando la vaina de mielina que rodea los axones neuronales.

La sección de control exhibe axones con vainas de mielina muy compactas que contienen capas concéntricas de membrana plasmática. La sección lesionada exhibe mielina descompactada con grandes huecos.

El estrés afecta la función de los oligodendrocitos, alterando la vaina de mielina rica en lípidos que rodea los axones neuronales en la corteza prefrontal medial, una región del cerebro que regula las emociones.

Este video demuestra la inmunoprecipitación de fragmentos de ADN reticulados con la proteína diana de lisados de neuronas motoras derivadas de células madre utilizando perlas magnéticas recubiertas de anticuerpos específicos de proteína diana.

Este video muestra un protocolo para evaluar la integridad estructural de las uniones neuromusculares en los músculos longitudinales dorsales de Drosophila. El procedimiento consiste en teñir neuronas y músculos con dos anticuerpos distintos y comparar los patrones de fluorescencia entre moscas mutantes y salvajes. Una reducción en la tinción neuronal en moscas mutantes indica neurodegeneración, mientras que la estructura muscular permanece intacta.

Este video demuestra la evaluación de los efectos neurodegenerativos de un producto problema en Caenorhabditis elegans con neuronas marcadas con fluorescencia. Las neuronas normales muestran una fluorescencia brillante del soma y los procesos intactos, mientras que la fluorescencia disminuida, el soma hinchado y los procesos puntuados indican neurodegeneración.

Este video muestra un método para establecer un modelo de neuropatía de fibras pequeñas en ratones utilizando el agonista TRPV1 resiniferatoxina (RTX). Describe los pasos involucrados en la administración de RTX a ratones y explica cómo RTX induce la muerte neuronal en neuronas sensoriales de diámetro pequeño, estableciendo así el modelo de neuropatía.

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta...

Este video muestra el procedimiento de inducción de parálisis mediante la transferencia de células Th17 activadas dirigidas a la acuaporina-4 a un modelo de ratón. En el sistema nervioso central, las células Th17 activadas interactúan con los astrocitos que expresan acuaporina-4, desencadenando una respuesta inmunitaria que conduce a la parálisis de la cola y las extremidades en el ratón.

Este video muestra el proceso de evaluación de la disfunción motora en un modelo de ratón mediante la administración de toxina de tos ferina y un inóculo que contiene péptidos y adyuvantes que imitan la mielina, seguido de pruebas en cinta rodante para evaluar la función motora y evaluar el daño nervioso resultante debido a la activación inmune y la desmielinización.

Este video muestra la prueba de la escalera para evaluar la función motora en una rata hemiparkinsoniana con una lesión cerebral derecha. La lesión interrumpe la señalización de la dopamina, lo que perjudica el control de la pata izquierda, lo que hace que queden más perdigones en la escalera izquierda, lo que indica una disfunción motora.

Este video demuestra el uso de un ensayo de locomoción radial para evaluar la disfunción motora en C. elegans que expresan la proteína TDP-43 humana de tipo salvaje o mutante en ELA. Los gusanos con niveles variables de expresión de TDP-43 de tipo salvaje o mutante pueden arrastrarse, y su movimiento se mide por la distancia radial recorrida desde el punto central de la placa de ensayo. El ensayo distingue entre deficiencias motoras leves, moderadas y graves en función de la distancia recorrida...

Este video muestra la evaluación del músculo utilizando neuronas motoras cultivadas, células de Schwann y miotubos, seguido de un tratamiento con un bloqueador neuromuscular para inhibir la contracción. Los gráficos de movimiento de tiempo codificados por colores muestran un gráfico de movimiento de tiempo codificado por colores. El rojo indica el movimiento más rápido y el azul indica el más lento.

Este video demuestra la visualización de las interacciones proteína-proteína en la unión neuromuscular (NMJ) de Drosophila utilizando el Ensayo de Ligadura de Proximidad (PLA). Después de aislar las paredes del cuerpo, las proteínas que interactúan se prueban con anticuerpos primarios y anticuerpos secundarios conjugados con PLA. La proximidad de las proteínas que interactúan facilita la ligadura de las sondas con oligonucleótidos conectores, formando ADN circular, que luego se amplifica...

Fuente: Wagner, K. et al., Estudio del tráfico de proteínas de membrana en células fotorreceptoras de Drosophila utilizando proteínas marcadas con eGFP. J. Vis. Exp. (2022). Este video muestra la visualización del tráfico de proteínas de membrana en células fotorreceptoras de Drosophila utilizando proteínas TRPL marcadas con eGFP. En él se detalla la preparación de moscas transgénicas para la obtención de imágenes, la captura de imágenes de fluorescencia de células fotorreceptoras y la...

Fuente: Deseure, K., et al. Lesión crónica por constricción del nervio infraorbitario de la rata (IoN-CCI) para estudiar el dolor neuropático del trigémino. J. Vis. Exp. (2015). Este video muestra un método para inducir dolor neuropático en un modelo de rata mediante la constricción del nervio infraorbitario. Después de exponer el nervio infraorbitario y atar ligaduras para constreñirlo, la respuesta inmunitaria en el sitio de la lesión aumenta la excitabilidad de las neuronas vecinas, que...

Fuente: Brakkee, E. M., et al. Cirugía y pruebas conductuales en el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas. J. Vis. Exp. (2023). Este video muestra un procedimiento para generar un modelo de transposición de neuroma tibial (TNT) en ratas. Después de exponer el nervio tibial en la pata trasera de una rata anestesiada, transecte el nervio. A continuación, crea un túnel subcutáneo, pasa el nervio cortado a través del túnel y sutura en su lugar. En ausencia de un objetivo para la...

Fuente: Lee, D. et. al., Condiciones experimentales modificadas para la pérdida de audición inducida por ruido en ratones y evaluación de la función auditiva y el daño de las células ciliadas externas. J. Vis. Exp. (2023)Este video muestra el procedimiento de la pérdida auditiva inducida por ruido en ratones. El sonido de alto volumen daña las células ciliadas del oído interno e interrumpe las vías auditivas, lo que provoca una discapacidad auditiva.

Fuente: Lee, D., et. al. Condiciones experimentales modificadas para la pérdida auditiva inducida por ruido en ratones y evaluación de la función auditiva y el daño de las células ciliadas externas. J. vis. exp. (2023)Este video muestra la medición de la respuesta auditiva del tronco encefálico (ABR) en un ratón. Se colocan electrodos en la cabeza, detrás de la oreja y cerca de la cola de un ratón anestesiado. Se emiten estímulos acústicos a varias intensidades y las señales eléctricas...

Fuente: Olmstead, D. N., et al., Axotomía del nervio facial en ratones: un modelo para estudiar la respuesta de las motoneuronas a las lesiones. J. Vis. Exp. (2015). Este video muestra el procedimiento de aplastamiento del nervio facial en un ratón, donde la disección contundente a través de puntos de referencia clave expone el tronco del nervio facial en el agujero estilomastoideo. A continuación, se utilizan fórceps para comprimir el tronco nervioso, induciendo daño axonal e interrumpiendo la...

Fuente: Cheah, M., et al. Inyección de ganglios de la raíz dorsal y lesión por aplastamiento de la raíz dorsal como modelo para la regeneración sensorial de axones. J. Vis. Exp. (2017). Este video muestra un procedimiento paso a paso para inyectar una suspensión viral en los ganglios de la raíz dorsal (DRG) e inducir una lesión axonal controlada a través de un aplastamiento de la raíz dorsal en una rata anestesiada. El protocolo implica exponer los DRG, administrar un vector viral promotor del...

Para detectar la muerte celular apoptótica mediante el ensayo TUNEL, se trata el corte de cerebro con la enzima proteinasa-K.

Mediante microscopía de fluorescencia, visualice el nervio lesionado, que presenta un aumento progresivo de las hinchazones y desconexiones axonales.

La encapsulación del fármaco mejora la especificidad de las células tumorales y reduce la neurotoxicidad.

Este video muestra la entrega de Lesión Cerebral Traumática (TBI) en ratones. Después de exponer el cráneo, se marca el sitio del traumatismo craneoencefálico. A continuación, el ratón se coloca debajo del dispositivo TBI. El impacto se produce levantando la varilla de metal y permitiendo que caiga libremente sobre el impactador, que está en contacto con el cráneo.

Este video muestra la tinción de inmunofluorescencia de neuronas de hipocampo de rata cultivadas dentro de un chip microfluídico para analizar la maduración neuronal y la conectividad.

Este video demuestra la generación de un modelo de lesión neuronal en neuronas cerebelosas primarias de ratón. Describe los pasos involucrados en la inducción de la lesión neuronal utilizando NMDA, un agonista del receptor de neurotransmisores excitatorios, y glicina, un coagonista. El NMDA y la glicina se unen a receptores neuronales específicos, lo que provoca su sobreestimulación y provoca una afluencia masiva de calcio intracelular, que provoca daño y muerte de las células neuronales.

Este video muestra la tinción de inmunofluorescencia de un corte de cerebro de ratón para cuantificar la distribución de una proteína presináptica específica. El proceso consiste en el bloqueo de sitios inespecíficos, la aplicación de anticuerpos primarios para la proteína diana y un marcador de referencia, seguido de un marcaje de anticuerpos secundarios y una contratinción nuclear. El marcador de referencia garantiza una cuantificación precisa al proporcionar una línea de base consistente, y...

Este video muestra un método para investigar la lesión cerebral de las larvas de pez cebra utilizando microscopía electrónica de transmisión de barrido (STEM) a gran escala, una técnica que combina elementos de microscopía electrónica de barrido (SEM) y microscopía electrónica de transmisión (TEM) para producir imágenes de alta resolución. Describe los pasos involucrados en la preparación de muestras y la adquisición de imágenes STEM de alta resolución para identificar lesiones cerebrales.

Este video muestra un protocolo quirúrgico en un modelo de rata, detallando los pasos desde la preparación de la anestesia hasta la inducción de la lesión del nervio facial. Este protocolo es útil para estudiar la regeneración nerviosa y las técnicas quirúrgicas en la investigación médica.

Este video muestra el procedimiento para inducir una lesión cerebral traumática de cráneo abierto en un ratón haciendo una incisión en la línea media del cráneo, perforando el cráneo y quitando el colgajo óseo para exponer la corteza cerebral, y aplicando alta presión para inducir el trauma. A continuación, se sutura la herida para preparar el modelo de ratón para experimentos posteriores.

Este video muestra el procedimiento para inducir la muerte cerebral en un modelo de ratón mediante el aumento de la presión intracraneal controlada a través de un catéter de balón, imitando la muerte cerebral natural.

Este video muestra un procedimiento para generar lesiones cerebrales precisas y controladas en la corteza motora de la rata utilizando un láser.

Este video muestra la biotinilación y el marcaje fluorescente de sialoglicoproteínas modificadas en células madre y progenitoras neurales primarias, así como neuronas, y su visualización mediante microscopía de fluorescencia.

En este video, se utiliza un dispositivo de tubo de choque para generar una onda de choque rompiendo un diafragma de polímero a través de una presurización controlada. La onda de choque impacta en los cortes de cerebro contenidos en una bolsa asegurada, induciendo lesiones traumáticas en el corte de cerebro.

Este video muestra el procedimiento para preparar neuronas cultivadas para el análisis óptico de vesículas sinápticas recicladas. El proceso implica el marcaje por fluorescencia de las proteínas de las vesículas sinápticas y la inmunotinción para etiquetar y visualizar las vesículas recicladas dentro de las neuronas.

Este video demuestra el proceso de inducción de lesiones por estiramiento en neuronas derivadas de células madre pluripotentes inducidas humanas (hiPSCNs). Las células se toman en una placa multipocillos sin fondo con una membrana de silicona adjunta. Se aplica un estrés mecánico controlado en la membrana para inducir la disrupción del citoesqueleto y el daño de la membrana celular, induciendo un fenotipo de lesión por estiramiento en las células.

Este video muestra un procedimiento para infligir una lesión traumática de cabeza cerrada en moscas Drosophila anestesiadas utilizando un dispositivo de impacto con un impactador propulsado por gas. La lesión afecta la función neuronal y afecta la capacidad para caminar.

Este video muestra el procedimiento de lesión por puñalada cortical en ratones, que involucra la exposición del cráneo y la creación de lesiones cerebrales. Induce la astrogliosis reactiva, una respuesta neuroprotectora de los astrocitos, para estudiar el trauma, la inflamación y los mecanismos de reparación del SNC.

El video muestra un método para generar un modelo de ratón de lesión cerebral traumática (TBI) utilizando un dispositivo de percusión de fluido lateral (LFPI). Al anestesiar al ratón, el cerebro queda expuesto creando una ventana en el cráneo. Se conecta una cánula llena de solución salina a la ventana y luego se conecta al LFPI. El péndulo del dispositivo se libera para crear un pulso de presión que inflige una lesión cerebral traumática.

Este video muestra el procedimiento para inducir una lesión cerebral traumática (TBI) en un modelo de ratón. Se toma un ratón anestesiado con un cráneo expuesto para crear una abertura en el cráneo, y luego se induce una lesión cortical controlada utilizando un dispositivo de impacto. La lesión daña el tejido cerebral, lo que provoca un deterioro de la función cognitiva y la coordinación motora.

Este video muestra el procedimiento quirúrgico para realizar una hemisección de la médula espinal torácica en ratas. Describe los pasos para exponer el segmento de la médula espinal T8, realizar la hemisección para interrumpir los tractos neurales de un lado y proporcionar cuidados postoperatorios.

Este video muestra un método para inducir lesiones neuronales específicas en larvas de Drosophila utilizando un láser de alta potencia. Después de colocar la larva bajo un microscopio, un láser de baja potencia escanea las neuronas fluorescentes y luego aumenta la potencia del láser para inducir daño localizado. La lesión se confirma por el aumento de la fluorescencia y la aparición de un cráter en el lugar de la lesión.

El video muestra el uso de un dispositivo de Trauma de Alto Impacto (HIT) para inducir una lesión cerebral traumática (TBI) de cabeza cerrada en Drosophila. El traumatismo craneoencefálico provoca un traumatismo craneoencefálico mecánico que afecta a la función neuronal, lo que con el tiempo conduce a la neurodegeneración y la mortalidad.

Este video demuestra la inducción de una lesión cerebral traumática penetrante en el cerebro de Drosophila. Las moscas recién emergidas se seleccionan, se anestesian y se colocan bajo un microscopio estereoscópico equipado con fluorescencia. Se identifica el cuerpo del hongo que expresa GFP y se inserta un alfiler de Minutien para causar lesiones. Se permite que las moscas se recuperen para realizar estudios adicionales.

Fuente: Shandra, O. et al., Inducción de epilepsia postraumática en un modelo de ratón de lesión cerebral traumática difusa repetitiva. J. Vis. Exp.

Este video muestra la inducción de una lesión cerebral traumática (TBI) en una rata utilizando un dispositivo de lesión por percusión de fluido lateral (FPI). El procedimiento consiste en crear un agujero en el cráneo de una rata anestesiada para exponer la duramadre, a la que se conecta una cánula. Luego, la rata se conecta al dispositivo, que genera una onda de presión que llega al cerebro, imitando el traumatismo craneoencefálico al causar la muerte de las células neuronales y el daño...

Fuente: Yang, Z., et.al. Un modelo repetitivo de lesión en la cabeza por conmoción cerebral en ratones. J. Vis. Exp. (2016). Este video muestra la inducción de lesiones repetitivas en la cabeza por conmoción cerebral en un ratón utilizando un dispositivo de impacto electromagnético. El procedimiento consiste en colocar la punta de impacto entre las suturas interfrontal y lambdoidea en el cráneo de un ratón anestesiado y utilizar una punta de sonda para establecer con precisión la profundidad...

Fuente: Logsdon, A. F., et al. Modelo de onda expansiva de baja intensidad para la evaluación preclínica de la lesión cerebral traumática leve de cabeza cerrada en roedores. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la inducción de una lesión cerebral traumática leve de cabeza cerrada en un modelo de ratón utilizando una configuración de tubo de choque de gas presurizado. La onda de presión generada rompe la membrana de poliéster, entregando una onda de choque a la cabeza del ratón que resulta en...

Fuente: Macheda, T., et. al. Modelo de cabeza cerrada controlado electromagnéticamente de lesión cerebral traumática leve en ratones. J. Vis. Exp. (2022)Este video muestra el procedimiento para inducir una lesión de cabeza cerrada en un modelo de ratón utilizando un marco estereotáxico. El impacto controlado replica una lesión cerebral traumática leve, lo que permite a los investigadores estudiar los efectos neurológicos y la recuperación mediante la medición de los reflejos y el comportamiento...

Fuente: Elzat, E. Y. Y., et al., Establecimiento de un modelo de lesión medular por contusión en ratón basado en una técnica mínimamente invasiva. J. Vis. Exp. (2022). Este video muestra el método para inducir una lesión por contusión a nivel de la médula espinal T9 en un modelo de ratón, utilizando una plataforma coaxial para lesiones de la médula espinal. Se deja caer un peso sobre la médula espinal a nivel T9 que crea una contusión que inmediatamente causa decoloración e hinchazón del tejido.

Fuente: Lakshman, N., et al. Un ensayo de neurosfera para evaluar la activación de células madre neurales endógenas en un modelo de ratón de lesión mínima de la médula espinal. J. Vis. Exp. (2018). Este video muestra la activación y migración de células madre neurales (NSC) en un modelo de lesión de la médula espinal en ratones. Para exponer la médula espinal, se extrae una vértebra de la región torácica de la columna vertebral de un ratón anestesiado. A continuación, se crea una lesión...

Fuente: Kumar, S., et. al. Modelo de ratón de úlceras por presión después de una lesión de la médula espinal. J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra una inducción detallada de la lesión de la médula espinal en ratones. El ratón anestesiado se disecciona para exponer las vértebras T9-T10 y se extirpan sus apófisis espinosas. A continuación, se secciona la médula espinal expuesta para infligir la lesión. A continuación, se cierra el área quirúrgica y se permite que el ratón se recupere.

Este video muestra un método para evaluar la internalización de proteínas diana en los astrocitos corticales de ratón utilizando biotinilación, seguida de lisis celular, extracción de proteínas basada en estreptavidina, desnaturalización y análisis de Western blot para confirmar la internalización exitosa.

Este video muestra un método para evaluar la actividad de las proteínas utilizando neuronas del hipocampo sobre zonas de proteínas con patrones. Las neuronas exhiben repulsión en las zonas de proteínas de prueba y unión en las zonas de proteínas de control, lo que pone de manifiesto los efectos de la actividad de proteínas atractivas o repulsivas.

Este video muestra la inducción de glaucoma en una rata anestesiada mediante la inyección de solución salina hipertónica en la vena epiescleral. La solución salina entra en la malla trabecular a través del canal de Schlemm, causando cicatrices en el tejido, lo que bloquea la salida del humor acuoso y aumenta la presión intraocular. La presión elevada daña las células ganglionares de la retina, lo que provoca glaucoma.

Homogeneizar el tejido con un homogeneizador para liberar proteínas, incluida la ácido glutámico descarboxilasa, o isoformas de la enzima GAD, esenciales para la función cerebral.

Este video muestra el procedimiento de acceder quirúrgicamente al nervio óptico en un animal anestesiado y administrar con precisión lisolecitina para inducir la desmielinización focal, creando condiciones neuropatológicas para estudios posteriores.

Incubar el corte en un líquido cefalorraquídeo que contenga falsos neurotransmisores fluorescentes o FFN.

Este video muestra la inducción de convulsiones inducidas por la manipulación en un ratón infectado con el virus de la encefalomielitis murina de Theiler (TMEV). El ratón infectado, que tiene neuronas hiperexcitables, está expuesto a estímulos físicos externos. Esta exposición causa estrés, lo que conduce a una actividad eléctrica anormal en las neuronas, lo que resulta en convulsiones.

Este video muestra el procedimiento para inducir convulsiones inducidas por el calor en un ratón transgénico con mutaciones genéticas relacionadas con la epilepsia mediante el aumento gradual de la temperatura corporal en una cámara controlada. Este protocolo se utiliza para estudiar los mecanismos de las convulsiones y las posibles terapias para la epilepsia.

Este video muestra la inducción de eventos ictales en cortes corticales coronales de un ratón transgénico que expresa canales catiónicos activados por luz en neuronas piramidales excitadoras corticales. El corte se coloca en una cámara de registro y se inserta un electrodo de registro en la capa cortical superficial. Tras la perfusión con un fármaco inductor de convulsiones que bloquea los canales de potasio, las neuronas se vuelven hiperexcitables y generan eventos ictales espontáneos. Para...

Este video muestra el proceso de inducción de epilepsia en ratones usando inyecciones de pentilenetetrazol (PTZ), un antagonista del receptor GABA-A. La administración intraperitoneal repetida de PTZ reduce progresivamente el umbral de las convulsiones al inhibir la entrada de iones de cloruro, interrumpir la neurotransmisión inhibitoria y provocar hiperexcitabilidad en las neuronas que desencadenan las convulsiones. Este proceso da lugar a la ignición y el desarrollo de convulsiones...

Fuente: Soukupová, M., et al. Microdiálisis de aminoácidos excitatorios durante registros de EEG en ratas que se mueven libremente. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra la evaluación de los niveles de neurotransmisores excitatorios extracelulares en ratas con inducción de epilepsia crónica. Después de implantar una sonda de microdiálisis en el cerebro y confirmar la ausencia de convulsiones mediante electroencefalografía (EEG), se recolecta líquido extracelular para evaluar los niveles...

Fuente: Schönherr, S., et. al. Inmunomarcaje combinado optogenético y réplica de fractura por congelación para examinar la disposición específica de entrada de los receptores de glutamato en la amígdala de ratón. J. vis. exp. (2016)Este vídeo muestra el inmunomarcaje de réplicas fracturadas por congelación de tejido cerebral de ratón para microscopía electrónica. Las réplicas fracturadas y recubiertas se digieren para exponer los receptores. Se añaden anticuerpos primarios y secundarios...

En este video, las células de glioblastoma y microglía se mezclan con una solución de matriz polimérica y se transfieren a un inserto de cámara porosa donde se forma un gel que incrusta las células. La microglía estimula la migración de las células del glioblastoma a través del inserto poroso, imitando la invasión de las células tumorales en el tejido circundante, las células se fijan y se preparan para su posterior análisis.

En este video, se demuestra un método que permite la transferencia de mitocondrias marcadas con fluorescencia a células madre de glioblastoma (GSC) a través de la centrifugación. El éxito de la captación y la integración funcional de las mitocondrias del donante se confirman mediante la detección de la fluorescencia mediante microscopía confocal.

Fuente: Guyon, J., et al. Un modelo esferoide 3D para el glioblastoma. J. Vis. Exp. (2020)El video muestra la generación de un modelo esferoide tridimensional de la invasión de células tumorales. Los esferoides se forman a partir de células tumorales cerebrales humanas y se incrustan en una matriz de colágeno. Las células tumorales en la periferia esferoide adoptan un fenotipo invasivo, secretando proteasas para degradar el colágeno y avanzando para invadir la matriz circundante.

Fuente: Lim, M., et al. Modelado de metástasis cerebrales mediante inyección de células cancerosas en la arteria carótida interna. J. Vis. Exp. (2022)En este video, un ratón anestesiado se somete a un procedimiento quirúrgico en el que se inyectan células cancerosas en la arteria carótida común (CCA) para facilitar la entrega dirigida al cerebro. El procedimiento implica la sutura y manipulación precisas de las arterias carótidas para dirigir las células inyectadas hacia la arteria carótida...

Fuente: Ear, P. H., et. al. Establecimiento y caracterización de esferoides tumorales neuroendocrinos del intestino delgado. J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra la tinción por inmunofluorescencia de esferoides tumorales neuroendocrinos del intestino delgado. Los esferoides se fijan, permeabilizan y bloquean y luego se incuban con anticuerpos primarios y secundarios. Se añade un tinte a los núcleos de tinción antes de montarlos y visualizarlos bajo un microscopio fluorescente.

Fuente: Mudduluru, G., et. al. Medición en tiempo real basada en impedancia de la migración e invasión de células cancerosas. J. Vis. Exp. (2020)Este video muestra un ensayo basado en impedancia para medir la invasión y migración de células de glioblastoma. Las células degradan la matriz extracelular, se mueven a través de membranas microporosas y se adhieren a los electrodos, generando impedancia. Este análisis en tiempo real refleja su potencial invasivo para aplicaciones de investigación del...

Fuente: Bolcaen, J., et. al., irradiación guiada por PET y resonancia magnética de un modelo de rata con glioblastoma utilizando un microirradiador. J. Vis. Exp. (2017)Este video muestra el procedimiento para establecer un modelo de rata de glioblastoma mediante la inyección estereotáctica de células de glioblastoma causantes de tumores cerebrales en la corteza prefrontal.

Fuente: Méndez, F. M. et al., Inmunoprecipitación de cromatina nativa utilizando neuroesferas de tumores cerebrales murinos. J. Vis. Exp. (2018). Este video demuestra el aislamiento de complejos proteína-ADN de células de neurosfera derivadas de un tumor cerebral de ratón utilizando inmunoprecipitación de cromatina nativa. En él se detallan los pasos para la preparación de la cromatina, la inmunoprecipitación, el lavado y la digestión de proteínas para liberar el ADN para su análisis posterior.

Fuente: Núñez, F. J., et al. Evaluación de biomarcadores en glioma por inmunohistoquímica en cultivos de neurosfera de glioma 3D embebidos en parafina. J. Vis. Exp. (2019). Este video muestra una técnica inmunohistoquímica para marcar biomarcadores tumorales en neuroesferas tumorales cerebrales incluidas en parafina. Las secciones de la neurosfera se someten a una eliminación de parafina y rehidratación, seguida de un tratamiento para exponer los sitios de biomarcadores. A continuación, se...