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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Inyección del nervio óptico
- Anestesiar al animal con una inyección intraperitoneal de ketamina (75 mg/kg) y medetomidina (0,5 mg/kg)
nota: Después de la inducción de la anestesia, observe los reflejos de retirada (prueba de pinzamiento, reflejo corneal y palpebral, etc.) y su ausencia como indicación para iniciar la cirugía. Monitoree continuamente a los animales durante toda la cirugía y administre el medicamento anestésico adicional (10% de la dosis inicial de ketamina por recarga) si los reflejos están presentes. En los experimentos se utilizan ratas adultas (>12 semanas).
- Afeitar la piel de la zona quirúrgica. Coloque al animal en una almohadilla térmica (37 °C) para mantener la temperatura corporal durante la cirugía. Prepare la piel mediante la aplicación tópica de povidona yodada. Aplique un paño quirúrgico. Aplique ungüento oftálmico tópico para prevenir la sequedad de la córnea bajo anestesia general. Mantener la asepsia mediante el uso de instrumentos estériles.
- Haga una incisión de 1 a 1,5 cm en la piel por encima de la órbita de un ojo seleccionado al azar. Abra el tejido subcutáneo para llegar a la cavidad orbitaria con unas tijeras finas para el iris. Abrir la conjuntiva y la cápsula anterior de la espiga bajo el microscopio quirúrgico.
- Retraiga los músculos extraoculares y las glándulas lagrimales intraorbitarias para exponer aproximadamente 3 mm de longitud del nervio óptico. Abra las capas de duramadre y materia aracnoidea alrededor del nervio óptico longitudinalmente con una cuchilla oftálmica.
- Inserte la pipeta de vidrio en el nervio óptico a una distancia de 2 mm posterior al globo. La micropipeta de vidrio se conecta a una jeringa Hamilton.
- Inyecte lisolecitina al 1% (0,4 - 1,0 μl, con 0,02% de Evan's Blue que no tiene efectos sobre la mielinización) lentamente en el nervio aproximadamente durante un período de 30 segundos.
- Sutura la incisión en la piel. Aplique una pomada antibiótica para prevenir la infección. Los ojos de otros pueden servir como controles internos para los registros de electrofisiología.
- Coloque a los animales en una almohadilla térmica para recuperarse de la anestesia.