Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Anestesia y preparación
- Colocar al animal en la cámara de anestesia e inducir la anestesia general mediante isoflurano al 1,8% y oxígeno al 0,9 L/min.
- Confirmar un plano adecuado de anestesia mediante una evaluación de la respiración espontánea y una evaluación de la conciencia mediante la evaluación de la respuesta de la mueca del animal a un pellizco en el dedo del pie.
- Aplique el lubricante ocular bilateralmente para protegerlo contra la irritación o sequedad de la córnea.
- Afeitar el (los) sitio(s) operatorio(s) con una navaja de afeitar o una maquinilla automática.
- Establezca un método para la identificación de ratas en este momento, ya sea a través de una marca en la oreja o una etiqueta/marcado en la cola.
- Administrar una inyección subcutánea de 0,05 mg/kg de buprenorfina a lo largo del lomo del animal para la profilaxis del dolor postoperatorio.
>2. Abordaje quirúrgico y patrones de lesión
- Transfiera el animal a la mesa de operaciones y continúe el flujo de gas a través de un cono de nariz. Asegúrese de que se coloque una almohadilla térmica debajo del animal y el campo estéril para mantener su temperatura corporal.
- Coloque una gasa esterilizada (enrollada y sujeta con cinta adhesiva) en el cuello de la rata para usarla como un rollo de cuello; esto mejorará la exposición del campo quirúrgico. Tenga en cuenta que la posición adecuada del animal es primordial para una identificación y disección nerviosas eficientes.
- Prepare la piel facial del animal para el procedimiento. Para asegurar la desinfección, frote el sitio quirúrgico tres veces con clorhexidina o una solución a base de yodo alternando con etanol al 70%.
- Planifique y marque la incisión quirúrgica si lo desea. Manipular la oreja ipsilateral en dirección antero-posterior para determinar el plegamiento natural de la piel postauricular.
- Haz una incisión de 4-5 mm en el pliegue postauricular con unas tijeras afiladas para el iris o con una cuchilla número 15. Esto se puede ampliar más adelante en el procedimiento según sea necesario.
- Diseccione sin rodeos a través de la fascia subcutánea inmediata y coloque un retractor micro-Weitlaner para mejorar la exposición. Tenga en cuenta que puede haber vasos sanguíneos de pequeño calibre en esta área; la mejor manera de evitarlos es retraerlos superior o inferiormente a través del retractor Weitlaner.
- Identifique el músculo digástrico anterior a medida que viaja en una dirección inferior a superior hacia su inserción a lo largo de la base del cráneo.
- Extienda suavemente a través del vientre muscular a lo largo de su punto de inserción para revelar el tendón del vientre digástrico anterior. Tenga en cuenta que el tendón aparece como un proceso blanco y transparente que emana del músculo con una inserción sólida en la base del cráneo.
- Después de identificar el músculo digástrico anterior y su tendón, ajuste el retractor Weitlaner para retraer aún más el vientre muscular. Nótese que la región expuesta posteriormente es el espacio tridimensional donde se encuentra el tronco principal del nervio facial.
nota: Esta región está delimitada superior y medialmente por la base del cráneo, lateralmente por el músculo digástrico anterior, posteromedialmente por el canal auditivo e inferiormente por las estructuras del cuello, incluida la arteria temporal superficial.
- Después de una exposición adecuada, identifique el tronco principal del nervio facial a medida que viaja inferiormente desde debajo del tendón del músculo digástrico, donde sale del agujero estilomastoide desde la base del cráneo. Nótese que el nervio aparece como un cordón blanco nacarado encerrado en la fascia parótido-masetérica del animal. Tenga cuidado al exponer aún más el nervio por las siguientes razones.
- Evite la disección agresiva o las distribuciones perpendiculares para protegerse contra la lesión de la neuropraxia mediada por estiramiento.
- Evite la disección agresiva dirigida hacia atrás y medialmente para evitar la violación de los tejidos delgados que recubren el canal auditivo, ya que esto podría introducir flora del oído medio en el campo quirúrgico.
- Evitar dañar la arteria temporal superficial mediante una disección amplia dirigida medial e inferiormente. Tenga en cuenta que una lesión se identificará por un sangrado rápido y pulsátil.
- Si la arteria está lesionada, aplique presión inmediata con un aplicador con punta de algodón o una gasa estéril con pinzas. Los agentes hemostáticos o el sellador de fibrina líquida se pueden colocar cerca de ellos. Tenga en cuenta que el animal puede requerir una inyección subcutánea de solución salina estéril al 0,9% para la estabilización de líquidos.
- Traza el tronco principal distalmente diseccionando a lo largo del nervio en una dirección inferior, distalmente desde la salida del agujero estilomastoideo.
- Extienda la incisión original para exponer el nervio y sus ramas por completo. Evite alterar la glándula parótida, ya que esto podría provocar sialocele postoperatorio.
- Induzca los patrones de lesión deseados de la siguiente manera.
- En el caso de una lesión por aplastamiento, utilice unas pinzas de joyero de superficie lisa para agarrar firmemente el nervio y comprimirlo9. Aplique una presión constante y reproducible al nervio durante 30 segundos para garantizar una lesión por aplastamiento adecuada.
- Para una transección simple, agarre la fascia que recubre el nervio, o el epineurio inmediato, con pinzas de dientes finos, y use microtijeras afiladas para seccionar limpiamente el nervio en el punto deseado con un solo corte. Tenga cuidado de evitar el exceso de tracción en el nervio con las pinzas.
- Para un modelo de espacio nervioso, cree el espacio nervioso deseado utilizando un método similar a la lesión de transección simple. Utilice el eje esterilizado de un aplicador con punta de algodón cortado a la longitud deseada del espacio nervioso durante el tiempo para garantizar la similitud del patrón de lesiones entre los animales.
>3. Cierre de heridas
- Irrigar la herida con solución salina estéril y secarla con gasa estéril.
- Aproxime los bordes de la piel de una manera simple y subcuticular con suturas absorbibles, o use pegamento para la piel o clips para heridas, que también son aceptables para el cierre de heridas. Coloque una puntada enterrada tomando un mordida de profundo a superficial de un borde de la piel y luego una mordida posterior de superficial a profunda del borde opuesto de la piel.
