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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
>1. Craniectomía e impacto cortical controlado
- Preparación del dispositivo de impacto cortical controlado y de los suministros quirúrgicos.
- Cargue una jeringa de punta deslizante de 1 mL con 0,5 mL de solución salina estéril para la irrigación de heridas. Coloque una aguja de 25 G en la jeringa para controlar la irrigación.
- Prepare una solución diluida de ciclosporina A (CsA) en dimetilsulfóxido (DMSO) hasta una concentración final de 1 mg/mL. Cargue una segunda jeringa de punta deslizante de 1 mL con 0,5 mL de solución de CsA para inmunosupresión. Coloque una aguja de 25 G o más grande en la jeringa CsA.
- Conecte el pistón de impacto cortical controlado a un brazo en un marco estereotáxico y ajústelo en un ángulo de 15 °. Coloque una sonda de impacto de 3 mm en el pistón.
- Ajuste la velocidad de impacto a 1,5 m/s y el tiempo de permanencia del impacto a 0,1 s para producir una lesión cortical leve.
- Realizar una craniectomía unilateral
- Coloque el ratón en una cámara de inducción de anestesia conectada a un vaporizador de isoflurano con una fuente de oxígeno comprimido. Inducir la anestesia con ~3% de isoflurano a ~0,7 L/min de oxígeno. Verifique la profundidad de la anestesia por la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie.
- Afeita el cuero cabelludo con una maquinilla eléctrica y limpia el pelo suelto.
- Coloque el ratón en un marco estereotáxico con un cono nasal de administración de anestésico adjunto.
- Coloque una almohadilla térmica de 37 °C en el marco estereotáxico debajo del mouse para mantener la temperatura corporal bajo anestesia. Fije la cabeza en su lugar con barras para las orejas y una barra de mordida y oriente la cabeza de modo que el hueso frontal del cráneo quede horizontal. Mantenga la anestesia a ~1.5%-2% de isoflurano durante la cirugía.
- Para realizar el cuidado preoperatorio y la preparación quirúrgica aséptica, aplique ungüento oftálmico antibiótico en los ojos con un hisopo de algodón estéril. Aplique una solución a base de yodo en el área del cuero cabelludo afeitado. Elimine esto con etanol al 70%. Cubra al animal con un paño quirúrgico fenestrado de modo que la parte superior de la cabeza sea visible, pero los ojos estén cubiertos.
- Haga una incisión en la línea media (1,5-2 cm) en el cuero cabelludo con un bisturí o unas tijeras. Use hisopos de algodón estériles para limpiar la herida y para despejar la fascia izquierda de la línea media en bregma.
- Use la sonda impactadora para identificar el sitio de la craniectomía.
- Establezca el punto de referencia estereotáxico (X = 0, Y = 0) en bregma. Ajuste la sonda lateralmente a 2 mm a la izquierda de la línea media. Delinee un círculo de 5 mm de diámetro alrededor de la sonda con un marcador de punta fina y seguro para cirugía. Levante y gire el impactador fuera de su posición.
- Utilice la herramienta manual del kit de micromotor rotativo de alta velocidad para hacer un agujero abierto en el cráneo con una broca de rebaba de punta redonda de 0,6 mm o 0,8 mm a una velocidad máxima de ~70%-80%. Aplique una ligera presión en el cráneo mientras perfora a lo largo del contorno circunferencial de 5 mm para adelgazar este borde.
- No aplique demasiada presión mientras perfora. La vibración, la compresión o la penetración accidental pueden causar lesiones corticales. En su lugar, permita que la velocidad de la broca haga el trabajo.
- No perfore en un lugar determinado durante demasiado tiempo para evitar el calentamiento excesivo por fricción del cráneo. Irrigar la craniectomía de vez en cuando con solución salina estéril para eliminar los residuos y reducir el calentamiento de la herramienta rotativa.
- Preste mucha atención al perforar sobre la línea de sutura coronal, ya que estos puntos son vulnerables a la hemorragia.
- Use un par de pinzas finas para quitar el colgajo del cráneo cuando el contorno de la craniectomía esté lo suficientemente adelgazado. Agarre la solapa medialmente y levántela y tire suavemente lateralmente con un movimiento radial.
- No dañe la duramadre al levantar el colgajo, ya que esto puede causar lesiones graves y hemorragias.
- Realizar una lesión leve por impacto cortical controlado
- Limpie la sonda del impactador con una almohadilla estéril de preparación con alcohol. Mueva la sonda del impactador de nuevo a su posición sobre la corteza expuesta. Baje la sonda hasta que toque la superficie de la duramadre. Marque esta posición como Z = 0.
- Retire el pistón y muévalo a Z = -1.0 mm. Descargue el pistón para impactar la corteza.