Establecimiento de una infección activa por el VIH en un modelo de ratas

Resumen

Fuente: Li, H., McLaurin, et al. A Rat Model of EcoHIV Brain Infection. J. Vis. Exp. (2021).

Este video muestra el procedimiento de inyectar virus quiméricos del VIH en la corteza del cerebro de una rata, donde el ARN del virus se integra en el genoma del huésped, se replica y se propaga para establecer una infección activa por el VIH en el modelo experimental.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Cirugías estereotáxicas del virus EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein]

1. Anestesiar ratas con sevoflurano al 3%. Cuando las ratas no responden a los estímulos nocivos y sus reflejos están ausentes, continúe con el paso 1.2.
2. Afeita el vello de la región del cerebro y esteriliza la piel dos veces con etanol al 70% y un exfoliante a base de clorhexidina. Asegure a la rata en posición prona en el aparato estereotáxico.
3. Haga una incisión (5-6 cm) a través de la piel a lo largo de la línea media del cuero cabelludo.
4. Marque dos posiciones de perforación a 0,8 mm lateral, 1,2 mm rostral a bregma. Taladre un agujero (diámetro de 0,4 mm) en cada posición del cráneo.
5. Llene la solución de lentivirus EcoHIV titulada (1,04 × 10⁶ TU/mL) en una jeringa inyectable de 10 μL. Asegure la jeringa al aparato estereotáxico.
6. Mueva la aguja hacia abajo cerca de la superficie del orificio de perforación. Mide y mueve 2,5 mm de profundidad.
7. Infundir 1 μL de solución viral a una velocidad de 0,2 μL/min. Mantenga la aguja dentro del área de inyección durante 5 min. Mueva lentamente la aguja hacia arriba hasta que quede fuera del cráneo de la rata.
8. Sutura la piel con un hilo de seda 4-0.
9. Esterilice la incisión con etanol al 70% una vez. Inyectar butorfanol por vía subcutánea (Dorolex, 0,1 mg/kg de peso corporal).
10. Transfiera la rata a una cámara de recuperación con una almohadilla térmica hasta que se despierte.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Solución antibiótica-antimicótica	Cellgro	30004CI	100X
Cubreobjetos	VWR	637-137
perforar
Ethicon Vicryl Plus Antibacteriano, 4-0 Polyglactin 910 Sutura, 27 pulg. FS-2	Med Vet International	VCP422H
Jeringa Hamilton	Hamilton	Año 1701
Pinzas de iris	Instrumentos de precisión mundial	Año 15914
Tijeras de iris	Instrumentos de precisión mundial	500216
Aparato estereotáxico	Instrumentos Kopf	Modelo 900
Tijeras Vannas	Instrumentos de precisión mundial	500086