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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Establecimiento de infarto en la protuberancia
- Precaliente la almohadilla térmica inmediatamente antes de la anestesia.
- Coloque el taladro de cráneo en el soporte del marco estereotáxico.
- Inyectar intraperitonealmente a las ratas 50 mg/kg de ketamina y 5 mg/kg de xilacina. Verifique la falta de respuesta de pellizco de los dedos de los pies.
- Monta la rata en el marco estereotáxico en posición prona. Coloque las barras de los oídos por encima del canal auditivo para asegurar la cabeza. Asegúrese de que el cráneo se mantenga horizontal para evitar cualquier sesgo de la inyección.
- Mantener la anestesia con isoflurano (100% de oxígeno, 2,5% de isoflurano) a través de un accesorio de cono de nariz estereotáxico para ratas con puertos de entrada y salida. Utilice una almohadilla térmica para mantener la temperatura a 37 °C y contrólela durante todo el procedimiento.
- Use ungüento para los ojos para prevenir la sequedad de la córnea. Use fórceps para pellizcar las patas para asegurarse de que no haya una respuesta de dolor ligera.
- Afeita el vello de la calavera con una microafeitadora. Aplique circularmente el exfoliante quirúrgico de clorhexidina comenzando en el sitio de la incisión quirúrgica y rotando hacia afuera.
- Hacer una incisión de 3 cm en la línea media con un bisturí desde la línea del canto lateral bilateral hasta 0,5 cm detrás de la fontanela posterior, que debe marcar un rotulador quirúrgico.
- Use un hisopo de algodón para extraer la sangre.
- Se debe colocar un trozo de cinta quirúrgica a cada lado del colgajo de piel para exponer el cuero cabelludo (Figura 1).
- Retire suavemente los tejidos conectivos del hueso del cráneo con un bastoncillo de algodón humedecido en NaCl al 0,9%. Si no se eliminan, los tejidos conectivos quedarán atrapados en el taladro.
- Identifica el bregma. Elige el punto central del bregma como punto de origen y márcalo con un rotulador quirúrgico negro de punta fina.
- Coloque un taladro a 6,0 mm AP, 2,0 mm ML (rango de 0,5 a 3,0 mm, Figura 2A).
- Realizar craneotomía (1 mm de diámetro) con un taladro automático. Proceda con cuidado porque este punto está cerca del seno venoso.
- Retire el taladro del marco estereotáxico.
- Coloque una sonda de 22 G con una vaina aislada en el marco estereotáxico (Figura 3A). La punta de la sonda debe colocarse 2 mm por encima del extremo proximal de la vaina (Figura 3A, B; Figura 2B).
- Asegúrese de que la vaina entre en el cerebro 7 mm (7 mm DV, Figura 2B; Figura 1C).
- Avance la sonda a lo largo de la vaina (Figura 1D) hasta que la punta de la sonda esté 9 mm por debajo de la superficie del cerebro (Figura 2D).
- Conecte los electrodos a un estimulador eléctrico (Figura 3C). Conecte el ánodo a la sonda como se muestra en la Figura 1D. Conecte el cátodo a las ratas (generalmente al oído de las ratas).
- Encienda el estimulador eléctrico y configure los siguientes parámetros: ancho de pulso único = 4,050 ms; voltaje = 50 V; y corriente = 4 mA (Figura 3C). Durante la estimulación eléctrica, la rata mostrará temblores. En este estudio, el dispositivo no se encendió para las ratas del grupo de control utilizadas para las pruebas de comportamiento, la resonancia magnética y la TTC.
- Deje la sonda en su posición durante 5 minutos después de la estimulación.
- Retire la sonda del cerebro (Figura 1F).
- Use cemento óseo para cubrir la craneotomía. Deje que el cemento se seque antes de suturar la herida.
- Suturar la herida con filamentos de sutura de poliamida 4-0. Después de tres o cuatro puntos, ate nudos quirúrgicos estándar 2-1-1.
- Inyectar a las ratas penicilina (0,25 mL, 80 UI diluidas en 4 mL de solución salina) por vía intraperitoneal para prevenir la infección.
- Inyectar meloxicam por vía subcutánea a las ratas a una dosis de 2 mg/kg y repetir cada 24 h.
- Monitoree a las ratas cada 15 minutos hasta que estén completamente despiertas y devuélvalas a la jaula con una almohadilla térmica. Proporcionar acceso gratuito a alimentos y agua hasta el sacrificio.
nota: Todos los procedimientos deben seguir los principios quirúrgicos asépticos. Antes de la cirugía, colóquese una camiseta médica, una mascarilla quirúrgica y guantes estériles después de una exfoliación quirúrgica de las manos. Mantenga siempre el material de sutura estéril dentro del campo estéril.
