Realización de lesiones cerebrales inducidas por láser en un modelo de ratas

Resumen

Fuente: Kuts, R., et al. Lesión cerebral inducida por láser en la corteza motora de ratas. J. Vis. Exp. (2020)

Este video muestra un procedimiento para generar lesiones cerebrales precisas y controladas en la corteza motora de la rata utilizando un láser.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Procedimiento experimental de lesión cerebral inducida por láser

1. Anestesiar a la rata con una mezcla de isoflurano al 2% en oxígeno, permitiendo la ventilación espontánea. Verifique que haya suficiente profundidad anestésica pellizcando la cola con fórceps para ver si el reflejo de retirada está ausente.
2. Usando una almohadilla térmica con temperatura rectal regulada, mantenga la temperatura corporal central de la rata a 37 °C durante todo el procedimiento experimental.
3. Retira el vello local con una afeitadora y desinféctalo con alcohol al 70% y gluconato de clorhexidina al 0,5%. Repita el paso de desinfección dos veces más.
   NOTA: La incisión quirúrgica debe tener aproximadamente 3 cm de ancho. Retire el vello al menos 2 cm alrededor del área de la incisión.
4. Coloque a la rata en un soporte de cabeza estereotáxico en posición prona. Realice una incisión de 3 cm para reflejar el cuero cabelludo lateralmente y exponer el área entre Bregma y Lambda.
5. Mantenga la anestesia a través del cono de la nariz.
6. Utilice el láser de neodimio-YAG (Nd-YAG) (longitud de onda máxima de 1064 nm) para administrar 50puntos J X 10, con una duración de pulso de 1 s, en el área expuesta del cráneo por encima del hemisferio derecho.
7. Asegúrese de que la parte generadora de láser del aparato esté a 2 mm de distancia del área expuesta para producir un rayo láser. Se seleccionaron 50puntos J X 10 después de una evaluación cuidadosa de diferentes combinaciones de energía/superficie. Esta combinación es eficiente y no causa destrucción ósea del cráneo después de la administración durante menos de un segundo.
   NOTA: 2 mm es la distancia entre el terminal del rayo láser (desde el cable óptico por el que se pasa) y el hueso del cráneo. En caso de que se utilice una lente de enfoque, se debe calcular la distancia, teniendo en cuenta el ángulo de inclinación de la lente para enfocar el haz en el área deseada de daño. Garantice la seguridad adecuada al usar un dispositivo láser, incluida la capacitación y la protección ocular adecuadas.
8. Retire la rata del dispositivo y cierre el cuero cabelludo con suturas quirúrgicas de seda 3-0.
9. Suspenda la anestesia y regrese a la rata a su jaula para que se recupere. Administrar 0,1 mL de bupivacaína al 0,25% localmente para reducir el dolor postoperatorio inmediatamente después de la cirugía.
   nota: Todo el procedimiento debería durar menos de 5 minutos si se realiza correctamente.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Matrices Cerebrales y Tisulares	SIGMA - ALDRICH	Año 15013
Báscula de pesaje digital	SIGMA - ALDRICH	RS 4000
Etanol 96 %	ROMICAL		Líquido inflamable
Calefactor con termómetro	Almohadilla térmica-1	Modelo: HEATINGPAD-1/2
Brazalete de infusión	Abn	IC-500
Isofluran, USP 100%	Piramamal Cuidados Críticos, Inc	NDC 66794-017
Hojas de bisturí 11	SIGMA - ALDRICH	S2771
Máquina láser Sharplan 3000 Nd:YAG (granate de itrio y aluminio dopado con neodimio)	Industrias Láser Ltd
Soporte de cabeza estereotáxico	KOPF	900LS