Inducción de microhemorragias cerebrales en un modelo de rata utilizando lipopolisacárido

Resumen

Fuente: Li, D., et al. Microhemorragias cerebrales subagudas inducidas por inyección de lipopolisacárido en ratas. J. Vis. Exp. (2018).

Este video muestra el proceso de inducción de la ruptura de la barrera hematoencefálica (BBB) y microhemorragias cerebrales en un modelo de rata que utiliza lipopolisacárido (LPS). Destaca la secuencia de respuestas inmunitarias que conducen a un aumento de la permeabilidad de la BBB y al posterior daño del tejido cerebral.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Materiales

1. Preparación de la inyección de LPS
   1. Añadir 25 mL de agua destilada a 25 mg de polvo de LPS derivado de Salmonella typhimurium hasta una concentración final de 1 mg/mL. Almacene la inyección en un tubo estéril a 4 °C.
      cautela: El LPS es tóxico.

2. Animales

1. Administrar LPS a ratas macho Sprague-Dawley (SD), de 10 semanas de edad (peso promedio: 280 ± 20 g) por inyección intraperitoneal.
   cautela: Si las ratas se compran en otra organización, la fase de adaptación no debe ser inferior a 7 días.

>3. Inyecciones de LPS

1. Inyectar LPS por vía intraperitoneal en cada rata a una dosis de 1 mg/kg y devolver las ratas a su jaula de origen.
   nota: La anestesia no es necesaria.
2. Seis horas más tarde, inyecte la misma dosis de inyección de LPS en las ratas.
3. Dieciséis horas más tarde, inyecte la misma dosis de LPS en las ratas.
   cautela: La inyección de LPS en ratas SD a una dosis de 1 mg/kg puede dar lugar a una tasa de mortalidad del 5%. La tasa de mortalidad podría aumentar aún más en ratas más jóvenes o viejas o en ratas hembras preñadas.
4. Regrese las ratas a sus jaulas después de la inyección de LPS y proporcione acceso ad libitum a la comida y la bebida.
   nota: Las ratas exhibirán una respuesta inflamatoria sistémica distinta y, por lo tanto, las jaulas deben permanecer limpias durante todo el experimento. Las ratas deben ser monitoreadas con frecuencia (2 veces al día) para determinar su peso, apariencia general y actitud después de la primera inyección de LPS. Si las ratas comienzan a exhibir una postura encorvada, falta de voluntad para moverse, pérdida de peso significativa (>20%) o tinción de porfirina, deben ser sacrificadas humanamente antes del punto final del estudio de 7 días.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Lps	Sigma-Aldrich	L-2630	para la inducción de la inflamación
Tampón de fosfato salino (PBS)	Solarbio	P1022	un tipo de solución tampón comúnmente utilizada en experimentos