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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
>1. Establecimiento de la neuropatía por resiniferatoxina (RTX)
>PRECAUCIÓN: RTX es neurotóxico y peligroso. Al contacto, actúa como irritante para los ojos, las membranas mucosas y el tracto respiratorio superior. Evite la inhalación y use anteojos y batas de laboratorio durante la preparación de RTX. Enjuagar con abundante agua en caso de contacto con la piel o después de la manipulación.
- Agregue 1 mg de polvo RTX a una mezcla de 200 μL de volumen igual de Tween 80 y etanol absoluto (100 μL para cada solvente).
- Alicuone la solución RTX (12 μL/vial) y guárdela a -20 °C durante un máximo de 3 meses. Esto constituye la acción RTX; desecha la solución RTX restante al vencimiento.
- Diluir el caldo RTX con solución salina normal hasta un volumen final de 600 μL. La concentración final de la solución RTX debe ser del 0,01%, lo que equivale a 1 μg de RTX en una solución de vehículo de 10 μL.
- Utilizar ratones machos adultos ICR de 8 semanas de edad (35-40 g) como animales de experimentación y administrar una dosis única de solución RTX (dosis: 200, 50 y 10 μg/kg, respectivamente) por vía intraperitoneal (i.p.) con una jeringa de microinyección a los ratones. Los ratones fueron anestesiados con inhalador con isoflurano al 5 % para anestesia profunda. Si los ratones mostraron acción de retirada de las extremidades durante la inyección de RTX, los ratones deben inhalar la anestesia durante más tiempo.
Ejemplo: Si el ratón pesa 40 g, recibirá 20 μL de la solución RTX, lo que representa la dosis de 50 μg/kg.
- Administre a un grupo de ratones un volumen igual de vehículo (10% de Tween 80 y 10% de etanol absoluto en solución salina) como control.
- Después de la inyección de RTX, devuelva a los ratones a una jaula de plástico en un ciclo de 12 horas de luz/12 horas de oscuridad y proporcione comida y agua ad libitum.