Una técnica para infligir una lesión cerebral traumática de cabeza cerrada en moscas Drosophila

Resumen

Fuente: Sun, M., et al. Un método novedoso para modelar la encefalopatía traumática crónica en Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Este video muestra un procedimiento para infligir una lesión traumática de cabeza cerrada en moscas Drosophila anestesiadas utilizando un dispositivo de impacto con un impactador propulsado por gas. La lesión afecta la función neuronal y afecta la capacidad para caminar.

Protocolo

1. Montaje del dispositivo de impacto (Figura 1)

1. Retire el émbolo de una jeringa de tuberculina de 1 mL. Corta el barril en la marca de 1 mL.
2. Retire una barrera de aerosol (3 mm de altura x 4 mm de diámetro) de una punta de pipeta de 200 μL y utilícela como impactador. Coloque el impactador dentro del cilindro de la jeringa. Golpee suavemente el cañón para mover el impactador al extremo de la punta, con el lado plano cubriendo la abertura de la boquilla.
3. Conecte el extremo de la punta del cañón a un tubo de plástico que está conectado al regulador de flujo de dióxido de carbono (CO₂) de una estación de anestesia Drosophila.
4. Sostenga el cañón verticalmente y sujételo a un soporte de soporte de abrazadera estándar para que el impactador permanezca en la parte inferior del cañón.
5. Modifique una punta de pipeta de 200 μL para hacer el soporte para moscas.
   1. Corte 4 mm de la punta para hacer una abertura de 0,8 mm de diámetro, permitiendo que solo quede expuesta la cabeza de la mosca.
      NOTA: El tórax y todas las demás partes del cuerpo de la mosca permanecerán dentro de la punta de la pipeta.
6. Modifique una punta de pipeta de 1.000 μL y un tapón de aguja de jeringa de 1 mL para hacer el conector.
   1. Corte 44 mm desde la abertura de la punta. Tome una longitud de 6 mm de la tapa de la aguja de una jeringa de 1 ml y empújela firmemente en el segmento restante de la punta de la pipeta de 1.000 μl.

>2. Funcionamiento del dispositivo de ataque

1. Anestesiar a una sola mosca hembra adulta de 2 días de edad usando CO₂ en una almohadilla.
2. Transfiéralo suavemente al soporte para moscas con un cepillo fino. Golpee suavemente el soporte para que la cabeza de la mosca se vea fuera del extremo de la punta. Si la probóscide de mosca está expuesta fuera de la punta, métala suavemente dentro de la punta con una aguja de jeringa desafilada de 1 ml.
   nota: Asegúrese de mantener la probóscide de mosca dentro del soporte. De lo contrario, la mosca puede morir por una lesión de la probóscide succionadora.
3. Apriete el soporte para moscas al cilindro de la jeringa con el conector de modo que la cabeza de la mosca quede hacia abajo.
4. Ajuste la presión del gas a 100 kPa. Ajuste el caudal de acuerdo con el diseño del experimento.
5. Gire rápidamente el interruptor de palanca del regulador de flujo para que el impactador golpee la cabeza de la mosca una vez.
6. Levante el soporte para moscas y muévalo sobre una almohadilla para moscas. Invierta el soporte para moscas y golpee suavemente el costado para dejar salir la mosca. Deje la mosca en un frasco vacío para que se recupere.

Resultados

Figura 1. Diagrama del dispositivo de ataque. El dispositivo utilizó materiales que están fácilmente disponibles en un laboratorio de Drosophila: 1) punta de pipeta de 200 μL, 2) jeringa de tuberculina de 1 mL, 3) impactador, 4) tubo de conexión conectado a una estación de anestesia de Drosophila y 5) conector para apretar la punta en la jeringa.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Barrera contra aerosoles	Científico de EE. UU	Teléfono: 1120-8810	Se utiliza como impactador
Punta de pipeta de 200 ul	Científico de EE. UU	Teléfono 1111-0706	Se utiliza como soporte de cabeza de mosca
Punta de pipeta de 1000 ul	Científico de EE. UU	1122-1830	Se utiliza como conector
1 ml Jeringa de tuberculina	Becton Dickinson	309625
Placas de Petri de 60 mm	Fisher Científico	FB0875713A	Utilizado como arenas de rastreo
Regulador de caudal	Genesee Científico	59-122WC
Soporte/soporte de abrazadera estándar	EISCO Científico	CH0688
Pincel fino	Genesee Científico	59-204
Almohadilla para moscas	Genesee Científico	59-114

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