Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Modelo de ratón de lesión cerebral neonatal por HI
- Anestesiar a los cachorros con isoflurano.
- Coloque los cachorros (menos de 5) en una caja de anestesia y cierre la tapa.
- Encienda el sistema de anestesia durante aproximadamente 15 minutos; ajuste el gas y el isoflurano con una máquina de anestesia de mesa. Ajuste el caudalímetro de oxígeno a 1,5 L/min. Ajuste el vaporizador de isoflurano al 3-5% para la inducción de la anestesia.
- Después de 15 minutos, ajuste el vaporizador de isoflurano al 1-2% para el mantenimiento de la anestesia.
- Coloque a un cachorro completamente anestesiado bajo un microscopio de disección (con el abdomen mirando hacia el investigador) y asegúrelo con cinta adhesiva.
- Haga una incisión de ~0,7 mm en el cuello con unas tijeras esterilizadas.
- Extraer cuidadosamente el tejido adiposo con pinzas esterilizadas y exponer la arteria carótida derecha unilateral.
- Ligar la arteria carótida derecha unilateral con una sutura reabsorbible 5-0.
- Suturar la incisión en el cuello con sutura 5-0.
- Coloque a cada cachorro en una cámara hipóxica tibia a 37 °C durante 1 h para su recuperación. No cierre la tapa de la cámara.
- 1 h después de la cirugía, cuando las crías estén completamente despiertas, cierre la tapa de la cámara de hipoxia y disminuya los niveles de gas para establecer condiciones hipóxicas (8%O2 y 92% N2).
- Después de 90 minutos de hipoxia, regrese a los cachorros a sus jaulas.
- Una semana después de la lesión cerebral HI, repita el paso 1.
- Después de la anestesia, realice una incisión en el cuero cabelludo con tijeras y pinzas esterilizadas para identificar la lesión cerebral en el área posterolateral del hemisferio derecho.
nota: Este tratamiento induce hipoxia en las crías. La presencia y el alcance de la lesión cerebral en todos los ratones se evalúa visualmente a simple vista a través del cráneo semitransparente. Según lo determinado por el tamaño o el volumen de la decoloración (es decir, la lesión cerebral), las crías se clasifican en grupos. Si no hay lesión cortical visible, el ratón se clasifica en el grupo "sin lesión cortical". Si hay una lesión cortical visible (es decir, una lesión en el hemisferio derecho), el ratón se clasifica en el grupo de "lesión cortical". Dado que la clasificación de los ratones en grupos se realiza una semana después de la operación, las agrupaciones pueden modificarse cuando las morfologías de las muestras de cerebro están claramente definidas en el momento del sacrificio.
