Generación de un modelo murino con una infección del sistema nervioso central

Resumen

Fuente: Shen, T., et al. Un modelo murino de enfermedad similar a la encefalitis viral aguda inducida por el virus del dengue. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra la generación de un modelo de ratón con una infección en el SNC. A una cría lactante se le inyecta el virus tanto por vía intracraneal como intraperitoneal. El virus se propaga, infectando el SNC causando la muerte de las células neuronales y la inflamación. El cachorro es evaluado para detectar síntomas de infección a medida que la enfermedad progresa.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Procedimiento de infección

1. Prepare existencias de DENV2 (cepa PL046) no adaptadas9 (originalmente obtenidas de los Centros para el Control de Enfermedades de Taiwán, que van desde 2,5 x 10⁷ hasta 1 x 10⁹ UFP/mL).
2. Diluya el stock de virus a 1 x 10⁶ PFU con medio Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 hasta un volumen total de 40 μL.
3. Llene una jeringa de 0,3 ml equipada con una aguja de 30 g con 10 μL (2,5 x 10⁵ PFU) de virus diluido y llene otra jeringa de 0,3 ml con una aguja de 30 g con 30 μL (7,5 x 10⁵ PFU) de virus diluido.
4. Sostenga el ratón lactante ICR (Instituto de Investigación del Cáncer) de 7 días de edad y realice los siguientes pasos.
   1. Para la inyección intracerebral, sostenga el ratón en posición prona presionando la aurícula entre el dedo índice y el pulgar, e inyecte intracerebralmente 10 μL de virus diluido en el área lambda, el punto en la intersección de la sutura sagital y lambdoidea.
   2. Después de la inyección intracerebral, sostenga el ratón en posición supina con el dedo índice y el pulgar, e inyecte suavemente 30 μL de virus diluido por vía intraperitoneal en el abdomen murino.
      nota: Para evitar el canibalismo, se utiliza alcohol al 75% para crear una pérdida temporal de la sensación olfativa de la madre. Además, se sugiere cubrir la camada con las heces y la orina de su madre.
5. Vuelva a colocar a los ratones lactantes en sus jaulas y espere 5 minutos para verificar su seguridad después de la estimulación con la avidez de los ratones, incluida la caminata y la succión de la leche materna.
   nota: La mayoría de las veces, los ratones demuestran una actividad normal después de la estimulación, y no parece haber ningún efecto nocivo después del desafío técnico.
6. Evaluar el progreso diario de los ratones en términos de peso corporal (mediante el uso de una balanza de microgramos), enfermedad aguda similar a la encefalitis viral (mediante la puntuación de la enfermedad como se describe en la sección 2) y tasa de supervivencia.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Roswell Park Memorial Institute 1640 mediano (RPMI)	Gibco	11875-085	Diluir el virus
Jeringa de insulina de 0,3 ml	BD UltrafinoII	328838	Inyección intracerebral e intraperitoneal
Microbalanza	LabX de METTLER TOLEDO	AL104	Peso del ratón
DENV2 no adaptado (cepa PL046)	Los Centros para el Control de Enfermedades de Taiwán	-	Infectar ratón
Ratón lactante del Instituto de Investigación del Cáncer (ICR)	BioLASCO Taiwán Co., Ltd	-	Nuestro modelo murino