Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Schmitz, K., et al. Bioluminiscencia e imagen en el infrarrojo cercano de la neuritis óptica y la inflamación cerebral en el modelo EAE de esclerosis múltiple en ratones. J. Vis. Exp (2017).

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta infiltración inicia una cascada de señalización que, en última instancia, resulta en daño a la mielina, imitando la condición desmielinizante de la esclerosis múltiple.

Protocolo

>1. Inducción EAE en ratones SJL/J

1. ratón
   1. Utilice ratones hembra SJL/J de 11 semanas de edad y permita que se habitúen a la sala experimental durante unos 7 días. Utilice n = 10 ratones por grupo.
   2. Para evaluar los efectos de la medicación, se administre continuamente el fármaco y el placebo para el grupo de control a través de agua potable o gránulos de comida a partir de 3 o 5 días después de la inmunización (n = 10 por grupo). Durante el pico de la enfermedad, administre medicamentos o placebo con leche o copos de maíz empapados en agua con un 3% de azúcar.
2. Material de inmunización
   1. Utilice un kit de inducción de EAE compuesto por antígeno (péptido de proteína proteolípido, PLP139-151, emulsión de 1 mg/mL) en una emulsión con adyuvante de Freund completo (CFA, Mycobacterium tuberculosis H37 Ra matado por calor) y 2 viales (5 μg cada uno) de toxina de tos ferina liofilizada (PTX).
   2. Disuelva el PTX (2 μg/mL) en 1x solución salina tamponada con fosfato (PBS, es decir, agregue 1,5 mL de PBS a cada tubo PTX, mezcle bien, retire con la misma punta de pipeta y agregue 1 mL de PBS en un tubo de 50 mL); mezcle bien.
3. inmunización
   1. Inyectar PLP/CFA por vía subcutánea en 2 porciones, cada una de 100 μL, ambas en la base de la cola.
   2. Inyectar 100 μL de PTX por vía intraperitoneal (i.p.) dos veces por ratón, la primera 1 a 2 h después de la inmunización y la segunda a las 24 h.
   3. Para los ratones de control, inyectar CFA sin PLP (2 porciones de 100 μL) más PTX sin PLP.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Emulsión PLP139-151/CFA	Laboratorios Hooke, San Lorenzo, MA	EK-0123	Kit de inducción EAE
Toxina de la tos ferina	Laboratorios Hooke, San Lorenzo, MA	EK-0123	Kit de inducción EAE
Espectro IVIS Lumina	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Estados Unidos		Sistema de bioluminiscencia e imágenes infrarrojas
Software LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Estados Unidos	CLS136334	Software de análisis IVIS
Isoflurano	Abbott Labs, Illinois, EE. UU.	26675-46-7	anestésico