Generación de una lesión cortical por arma blanca en un modelo de ratón para inducir astrogliosis reactiva

Abstract

Fuente: Allahyari, R. V. et al. Desencadenante de gliosis reactiva in vivo por una lesión por arma blanca en el prosencéfalo. J. Vis. Exp. (2015)

Este video muestra el procedimiento de lesión por puñalada cortical en ratones, que involucra la exposición del cráneo y la creación de lesiones cerebrales. Induce la astrogliosis reactiva, una respuesta neuroprotectora de los astrocitos, para estudiar el trauma, la inflamación y los mecanismos de reparación del SNC.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparando al ratón para la cirugía

1. Retire el ratón de la jaula de la casa y pese (g).
2. Coloque el ratón en una cámara de inducción de isoflurano y ajuste el oxígeno a 2 L/min y el vaporizador de isoflurano a 5 para inducir un plano quirúrgico de anestesia, unos 3-5 min. Controle la respiración lenta y la inmovilización. Compruebe que el ratón esté completamente sedado con el reflejo de pellizco de la punta del pie.
3. ....

Results

Figura 1: Esquema del cráneo del ratón que representa el área de la craneotomía. Las líneas azules representan las marcas iniciales que identifican los límites del área que se va a perforar. Las marcas superior e izquierda se miden a 1 mm por debajo o lateralmente a las suturas coronales o sagitales, respectivamente. Las marcas inferior y derecha se miden a 4 mm de las suturas coronal y sagital, resp.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Estereotasa	Aparato de Harvard	726049
Micro taladro de alta velocidad	Aparato de Harvard	724950
Hoja de bisturí de acero inoxidable, #11	MedVet	JOR581S
Pinzas en ángulo 5/45	Herramientas de Bellas Ciencias	11251-35
Esponja de espuma de gel 12cmx7mm	pescador	NC9841478
Anticuerpos y otros reactivos	fabricante	Número de catálogo	Dilución (campo claro) Dilución (fluorescencia)
Rb anti-GFAP	DAKO	Z033429-2	1:20k 1:1k
Shp anti-BrdU	Abcam	AB1893	1:2k 1:500
Cabra biotinilada anti-conejo	Laboratorios de vectores	BA-1000	07:40
Conejo biotinilado anti-ovejas	Laboratorios de vectores	BA-6000	07:40
Alexafluor 488 cabra anti-conejo	Tecnologías de la Vida	A-11008	07:40
Alexafluor 568 burro anti-ovejas	Tecnologías de la Vida	A-21099	17:40
Tinción de ácido nucleico DAPI	Tecnologías de la Vida	D3571	17:40
Cresyl Acetato Violeta	Sigma Aldrich	C5042-10G	1%