$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Cuidado de los animales
- En este experimento se utilizaron ratones machos C57BL/6J de 5 a 6 semanas de edad (20-25 g de peso).
- Mantenga a los ratones en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h/12 h, y asegúrese de que reciban comida y agua ad libitum. Proporcionar las mismas cantidades de comida y agua a los grupos simulados y a los grupos con LCT durante todo el estudio.
- Haga todo lo posible para minimizar el dolor y la incomodidad del animal.
>2. Inducción de lesión cerebral traumática
- Inyecte ketamina (80-100 mg/kg)/xilacina (10 mg/kg) IP para anestesia. Pruebe la profundidad de la anestesia con un reflejo ocular o un reflejo de dolor. Use lágrimas artificiales o ungüento lubricante para los ojos para evitar que los ojos se sequen.
- Después de la anestesia, coloque el ratón en posición prona. Use una almohadilla térmica con control de temperatura para mantener la temperatura a 37 °C durante la cirugía y durante 30 minutos después de una lesión cerebral traumática.
- Afeita el vello de la zona de la incisión.
- Desinfecte el cuero cabelludo con etanol al 70% utilizando tres exfoliantes alternos, luego incida el cuero cabelludo en un plano sagital.
- Use fórceps para retraer la incisión en ambos lados y separe ligeramente el periostio.
- Utilice un marcador para dibujar un círculo (3 mm de diámetro) en el área parietal derecha del cráneo, a 2 mm de distancia de la línea media.
- Taladra el cráneo con un taladro eléctrico. Asegúrese de que este paso se opere con cuidado para proteger la duramadre de daños.
- Retire el colgajo óseo y exponga una pequeña ventana ósea (3 mm de diámetro).
- Coloque una cánula de plástico para lesiones (diámetro interno = 2,5 mm, longitud = 8 mm) sobre la craneotomía y cemente la cánula al cráneo con un acrílico dental.
- Llene la cánula con NaCl estéril al 0,9% (solución salina normal) utilizando una jeringa (5 ml) para asegurarse de que no haya burbujas en la cánula.
- Encienda el osciloscopio y el amplificador y asegúrese de que el tubo de alta presión del dispositivo LFPI esté libre de burbujas de aire. Pruebe el dispositivo administrando unos 10 pulsos hasta que emita una señal constante. Ajuste el ángulo de la posición inicial del péndulo para alcanzar una intensidad de pulso de aproximadamente 2,0 atm.
- Conecte la cánula de lesiones al dispositivo LFPI. Inducir lesiones cerebrales apretando el gatillo y soltando el péndulo. Luego, obtenga un pulso y transmítalo a la duramadre a través de todo el sistema de tubos cerrados llenos de fluido.
- Opere a los ratones del grupo simulado con el mismo procedimiento quirúrgico. No realice el LFPI.