Inducción mediada por Cre-LoxP de malformaciones cavernosas cerebrales en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Choi, J. P., et al. Imágenes de inducción y micro-TC de malformaciones cavernosas cerebrales en modelo de ratón. J. Vis. Exp. (2017)

En este video, una cría de ratón modificada genéticamente portadora del gen Ccm2 flanqueada por sitios loxP y Cre recombinasa fusionada con un receptor de estrógeno se utiliza para inducir malformaciones cavernosas cerebrales (MCC). La administración de 4-hidroxitamoxifeno activa Cre en las células endoteliales, lo que conduce a la deleción de Ccm2 y la formación de CCM en el cerebro.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Inducción de Malformaciones Cavernosas Cerebrales o MCC en Modelos de Ratón

1. Cruz Cdh5-CreErt2; ratones Ccm2fl/fl con Ccm2fl/fl para generar camadas con Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) cachorros y controles de compañeros de camada (Ccm2fl/fl). Los animales Cdh5-CreErt2 y Ccm2fl/fl han sido descritos previamente19.
2. Disolver 4HT en etanol al 100% y almacenar a -80 °C en alícuotas de 30 μL de 4-hidroxitamoxifeno (4HT) (concentración: 10 mg/mL). El día de su uso, diluir alícuota 4HT en aceite de maíz (0,5 mg/mL).
3. Inyectar por vía intragástrica 50 μL de 4HT (0,5 mg/mL) a las crías neonatales en P1 para inducir lesiones experimentales de MCC utilizando una jeringa de insulina.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
4-hidroxitamoxifeno	Sigma-Aldrich	H6278	Para activar Cdh5-CreErt2
Aceite de maíz	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	Para diluir el 4-hidroxi tamoxifeno
Jeringa de insulina