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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Cirugía de hemisección torácica
- Use el equipo de protección adecuado (guantes, mascarilla y bata) para mantener un ambiente aséptico para la cirugía. Limpie el área quirúrgica con toallitas con alcohol y coloque paños quirúrgicos estériles sobre el campo quirúrgico. Esterilice las herramientas quirúrgicas y colóquelas en el campo quirúrgico.
- Anestesiar a la rata bajo una mezcla de gas isoflurano (3% de inducción, 0,5-3% de mantenimiento) y oxígeno (1 L/min). Confirmar la profundidad anestésica quirúrgica adecuada verificando la ausencia de pinzamiento de los dedos del pie y respuestas reflejas corneales. Monitoree continuamente a la rata durante todo el procedimiento y ajuste la cantidad de administración de anestésico según sea necesario para mantener la profundidad de la anestesia quirúrgica.
- Afeitar el tronco dorsal entre la cadera y el cuello, colocar la rata en el campo quirúrgico, desinfectar el sitio de la incisión con toallitas con alcohol y solución de proviodina, y mantener la temperatura corporal central a 37 °C utilizando una almohadilla térmica controlada por retroalimentación monitoreada por termómetro rectal.
- Coloque ungüento oftálmico en los ojos para mantenerlos hidratados y vuelva a aplicarlo durante la cirugía según sea necesario.
- Haz una incisión de 2,5 cm en la piel superponiendo las vértebras T6-T10 con un bisturí. Retraiga la piel y la grasa superficial con tijeras de disección romas.
nota: Los segmentos vertebrales T6-T10 se pueden identificar ya sea rostralmente por la palpación suave de los segmentos espinales dorsales desde la base del cráneo a partir de la protuberancia notable de la2ª vértebra torácica o caudalmente por palpación de la costilla flotante más posterior, que inducirá movimiento en la13ª vértebra torácica.
- Separe los músculos paravertebrales que se insertan en la cara dorsal de las vértebras T7-T9 con tijeras de disección romas y un retractor autorretenedor. Desbride y limpie cualquier tejido restante con pinzas finas y aplicadores con punta de algodón para exponer las apófisis espinosas y las láminas vertebrales.
nota: Este y los siguientes pasos son ayudados en gran medida por la visualización microscópica (~5-15x).
- Cortar cuidadosamente las facetas (articulaciones zigapofisias) bilateralmente en las vértebras T7 y T8 con delicados recortadores de huesos. Cortar superficialmente el tejido conectivo dorsal entre las láminas vertebrales T8 y T9 con un bisturí (1 mm de profundidad) teniendo cuidado de no lesionar el cordón subyacente.
- Extirpar la apófisis espinosa de la vértebra T8 con recortadores óseos. Con pinzas hemostáticas curvadas cuidadosamente sujetas en la apófisis espinosa T7, gire el extremo caudal de las láminas T8 ligeramente rostralmente (~20°), inserte los recortes óseos debajo de la lámina T8 y haga un corte en la línea media que se extienda a lo largo de la lámina. Continúe la laminectomía repitiendo los cortes en el lado izquierdo y derecho de la lámina vertebral medial a las apófisis transversas para exponer la médula espinal.
nota: Tenga cuidado de extirpar todos los fragmentos óseos creados a partir de la laminectomía.
- Gotee lidocaína (2%, 0,1 mL) en el canal espinal expuesto y extraiga la duramadre que recubre el segmento espinal T8 con pinzas finas y tijeras de iridectomía. Repita la administración de lidocaína en el cordón expuesto e identifique la línea media del cordón mediante la visualización de una línea central creada entre las apófisis espinosas que se extienden entre la vértebra T7-T9 expuesta><.
nota: Junto con las apófisis espinosas en T7 y T9, los ganglios de la raíz dorsal expuestos en T8 también se pueden usar para ayudar en la identificación de la línea media. Se puede colocar una aguja de 30 G en la línea media del cordón para ayudar con la hemisección posterior.
- Hemisectar la médula espinal desde la línea media hacia un lado con un cuchillo de disección. Tenga cuidado de no cortar a través de la arteria espinal anterior en el lado ventral (no aplique una presión firme sobre el cuerpo vertebral). Con las tijeras de iridectomía, corte con cuidado cualquier tejido restante en el lado lesionado de la médula espinal para asegurarse de que el cuadrante ventrolateral se seccione correctamente.
- Coloque una esponja hemostática estéril empapada en solución salina (~6 x 2 mm) en la cavidad expuesta por encima de la médula espinal y suture las capas musculares (4-0 polyglactin 910). A continuación, sutura la piel alrededor del sitio de la incisión.
- Proporcionar analgésico adecuado (buprenorfina 0,05 mg/kg subcutáneo [s.c.]), antibiótico (enrofloxacino, 10 mg/kg s.c.) y reponer los líquidos perdidos con 5 cc de solución de ringer lactato (intraperitoneal [i.p.]) inmediatamente después de la cirugía.
- Retira la rata de la anestesia. Coloque a la rata en un ambiente cálido debajo de una almohadilla térmica o lámpara (~ 33 ° C) hasta que el animal esté completamente despierto.
- Proporcione analgesia suplementaria diariamente durante los primeros 3 días posquirúrgicos y controle continuamente los signos de dolor, pérdida de peso, micción inadecuada, infección, problemas con la cicatrización de heridas o autofagia.