1. Construcción del dispositivo HIT
- Fije el resorte a la placa usando dos abrazaderas y cuatro tornillos (Figura 1A). Centre las abrazaderas en relación con el ancho de la tabla y empúñelas entre sí con la abrazadera exterior al ras del borde de la tabla. Antes de colocar las abrazaderas, dóblelas con unos alicates para que encajen firmemente sobre el resorte.
NOTA: Véase Tabla 1 para descripciones de los materiales necesarios para construir el dispositivo HIT. El extremo sujetado del resorte debe estar a 1/8 de pulgada (3,2 mm) del borde de la tabla, y el extremo libre debe extenderse sobre la tabla por 3/4 de pulgada (19 mm). Ajusta el muelle para que quede paralelo a la longitud de la tabla.
- Envuelva el extremo libre del resorte una vez con la tira adhesiva de bucles de velcro. El borde exterior del velcro debe estar al ras con el extremo del resorte. El velcro es importante porque se utiliza para asegurar el vial al resorte mediante la creación de un ajuste de compresión apretado. El Velcro también permite una fácil conexión y extracción de viales, lo que permite procesar muchos viales en un corto período de tiempo.
- Coloque la cubierta de la cubitera boca abajo, centrada, apretada contra la tabla de madera. Oriente la región elevada de la cubierta de la cubitera de modo que el borde largo quede paralelo a la anchura de la tabla. Tenga en cuenta que la región elevada de la cubeta de hielo es 1/2 pulgada (13 mm) más alta que la tabla de madera, de modo que cuando se conecta un vial al resorte, el resorte no quedará plano sobre la tabla.
- Deslice todo el dispositivo contra un objeto fijo, como una pared, de modo que la cubierta del cubo de hielo quede encajada entre la tabla y el objeto y no se mueva.
- Pega el transportador de papel en el fondo de una bandeja de cartón para moscas y colócalo en el borde contra la longitud de la tabla para que la marca de 90° quede alineada con el resorte cuando se tire hacia atrás a una posición perfectamente vertical.
2. Funcionamiento del dispositivo HIT
- Coloque entre 1 y 60 moscas anestesiadas con CO2 en un vial vacío y tape el frasco con una bola de algodón ajustada.
- Limite las moscas a la parte inferior de 1 pulgada (2,5 cm) del frasco empujando la bola de algodón dentro del frasco hasta que esté a 1 pulgada (2,5 cm) del fondo. Es útil dibujar una línea en el frasco en la marca de 1 pulgada (2,5 cm). Tenga en cuenta que confinar las moscas a regiones más grandes o más pequeñas del vial puede afectar la gravedad de los fenotipos.
- Espere 5 minutos para que las moscas recuperen la movilidad del CO2. Tenga en cuenta que no se sabe si 5 minutos son suficientes para eliminar completamente los efectos del CO2.
- Inserte el extremo del resorte en el vial hasta que el borde interior del Velcro quede al ras con la parte superior del vial (Figura 1B). Cuando el resorte esté plano, 1 pulgada (2,5 cm) del vial debe superponerse a la región elevada de la cubierta del cubo de hielo. Los viales se pueden reutilizar muchas veces.
- Mientras está sentado, sostenga el frasco en la región del Velcro con el pulgar y el índice de la mano izquierda. Sostenga la tabla firmemente contra la mesa de trabajo con la mano derecha. Alternativamente, use abrazaderas en C para sujetar la tabla firmemente a la mesa de trabajo.
- Tire del resorte perfectamente recto hacia atrás hasta el ángulo deseado. Suelta el resorte. Deje que el resorte se detenga por completo.
- Retire el frasco del resorte y deje que las moscas se recuperen durante ≥5 min. Someta a las moscas a otro golpe o transfiéralas a un frasco con comida para moscas.
NOTA: Se puede utilizar una variedad de ensayos para evaluar los efectos fenotípicos de los golpes del dispositivo HIT. Por ejemplo, los efectos sobre la longevidad se pueden determinar analizando el porcentaje de moscas que sobreviven a veces después de una lesión, los efectos sobre la morfología del cerebro se pueden determinar mediante el análisis histológico de la cabeza y los efectos sobre la expresión génica se pueden determinar mediante el análisis cuantitativo de los niveles de ARNm.
- Determine los efectos del procedimiento que no se deben a las colisiones tratando de manera idéntica las moscas de control que no están sujetas a las colisiones. Use protección auditiva porque el impacto del vial contra la tapa de la cubeta de hielo produce un ruido fuerte.
