Estimulación de las neuronas sensoriales de los ganglios de la raíz dorsal mediante un agonista del receptor de neuropéptidos

Resumen

Fuente: Lin, Y., et al., Aislamiento de ganglios de raíz dorsal y cultivo primario para estudiar la liberación de neurotransmisores. J. Vis. Exp. (2018)

Este video demuestra el uso de células ganglionares de la raíz dorsal transfectadas para estudiar la liberación de neurotransmisores estimulándolos con un agonista del receptor de neuropéptidos.

Protocolo

1. Liberación de Neurotransmisores de Células DRG Primarias

1. El día 6, después de la siembra de las células (72 h después de la transfección del siRNA), cambie el medio de cultivo a 200 μL de medio libre de suero e incube las células en una incubadora de CO₂ a 37 °C durante 30 min.
2. Añada 1 μL de producto químico de estimulación y mezcle suavemente los medios pipeteando. Incubar la placa en una incubadora de CO₂ a 37 °C durante el tiempo designado.
   nota: En este artículo, las células cultivadas se estimularon con el agonista NPFFR2, dNPA (D.Asn-Pro-(N-Me)Ala-Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Arg- Phe-NH2, 5 nmol), durante 1 h.
3. Recoja el medio de cultivo de la placa de cultivo y centrifuga a 5.000 x g durante 5 min a 4 °C para eliminar las impurezas en suspensión.
4. Recoja el sobrenadante de la centrifugación y diluya las muestras con solución salina tamponada con fosfato (PBS) según sea necesario. Luego, use kits de inmunoensayo enzimático (EIA) para analizar los niveles de neurotransmisores.
   nota: Aquí, los sobrenadantes se diluyeron 1:100 antes de analizar el nivel de CGRP. El sobrenadante no se diluyó antes de analizar el nivel de SP.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM-F12	Invitrogen	12400024	Medio de cultivo
Solución salina equilibrada de Hank	Invitrogen	14170-112	Medio de cultivo
Pipeta Pasteur	Hilgenberg	3150102	Trituración de células
dNPA	Síntesis Genética	N/A	Agonista NPFFR2