Estudio de la transmigración de linfocitos a través de una monocapa de células endoteliales microvasculares

En este artículo

Resumen

Fuente: Schulte-Mecklenbeck, A., et al., Análisis de la extravasación de linfocitos utilizando un modelo in vitro de la barrera hematoencefálica humana. J. Vis. Exp. (2017)

Este video muestra una investigación experimental de la transmigración de linfocitos a través de un modelo de endotelio de barrera hematoencefálica (BBB). Se genera una monocapa de células endoteliales microvasculares del cerebro humano (HBMEC) in vitro, y se añaden a la monocapa células mononucleares de sangre periférica (PBMC) que contienen linfocitos. A continuación, las células se incuban para permitir la transmigración de los linfocitos, y las células migradas se cuantifican mediante citometría de flujo.

Protocolo

1. Preparación de los insertos de cultivo celular

Recubrimiento de insertos de cultivo celular
Nota importante: Evite tocar la membrana de los insertos de cultivo celular.
1. Agregue 100 μL de solución de fibronectina a cada inserto de cultivo celular (Figura 1A) y un pocillo de una placa de fondo plano de 96 pocillos (pocillo de control óptico). Incubar durante al menos 3 h a 37 °C. Después de la incubación, aspire la solución de fibronectina.
2. Añada 100 μL de suspensión de HBMEC a los insertos de cultivo celular y al pocillo de control óptico. Añada 600 μl de medio de células en....

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Resultados

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Figura 1: Migración diferencial de subconjuntos de células NK a través de monocapas HBMEC inflamadas y no inflamadas.Una imagen de los insertos transwell (izquierda) e ilustración de la configuración experimental (derecha). B. Validación de las funciones de barrera HBMEC. Izquierda: tinción inmunohistoquímica de la molécula de unión estrecha ZO-1 utilizando zonula occludens-1 anti-hu.......