Prueba de escalera para la evaluación de la función motora en una rata hemiparkinsoniana

Resumen

Fuente: Rattka, M, et al., Un enfoque novedoso para evaluar el resultado motor de los efectos de la estimulación cerebral profunda en la rata hemiparkinsoniana: prueba de escalera y cilindro. J. Vis. Exp. (2016).

Este video muestra la prueba de la escalera para evaluar la función motora en una rata hemiparkinsoniana con una lesión cerebral derecha. La lesión interrumpe la señalización de la dopamina, lo que perjudica el control de la pata izquierda, lo que hace que queden más perdigones en la escalera izquierda, lo que indica una disfunción motora.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Prueba de escalera (Figura 1)

1. Fase de adquisición
   1. Un día antes del entrenamiento, familiarice a los animales con los pellets utilizados en la prueba de escalera.
      1. Opcional: Para aumentar la motivación del animal, utilice una restricción dietética (10-15 g de comida estándar de laboratorio para mantener el peso corporal al 90% del nivel de alimentación libre). Sin embargo, esto no es obligatorio para lograr un efecto positivo en el entrenamiento. Este estudio se realizó sin restricción alimentaria.
   2. Prepare una caja de escalera de vidrio de plástico transparente (altura: 34,5 cm, longitud: 35,5 cm, ancho: 12 cm y compartimento estrecho de 6 cm) limpiando la caja con una solución de ácido acético al 0,1%. nota: La caja de escalera es una caja de dos compartimentos con una plataforma elevada y dos escaleras en el compartimento estrecho. Los escalones izquierdos en las escaleras en el compartimento estrecho solo se pueden alcanzar con la pata izquierda, y los escalones correctos solo con la pata derecha.
      NOTA: Las cajas de escalera estándar constan de dos compartimentos con tapa. Si se van a utilizar para experimentos con ratas estimuladas por cable, utilice una caja alta sin tapa.
   3. Retire la escalera y llene los pozos de cada escalón con ocho gránulos de 45 mg.
   4. Inserte la escalera y coloque ocho perdigones adicionales en la plataforma elevada.
   5. Coloca la rata en la caja de transporte.
   6. Transporta a la rata desde la jaula de casa hasta la caja de la escalera usando la caja de transporte.
   7. Coloque la rata en la caja de la escalera (Figura 2).
   8. Después de cinco minutos, saque al animal de la caja de la escalera y vuelva a colocarlo en la jaula de la casa usando la caja de transporte.
   9. Fíjate en la cantidad de perdigones que se comieron de la plataforma y (eventualmente) de las escaleras derecha e izquierda.
   10. Vuelva a llenar la escalera llenando los pozos de cada escalón con ocho gránulos de 45 mg.
   11. Limpie la caja de la escalera con una solución de ácido acético al 0,1% y coloque los gránulos adicionales en la plataforma.
   12. Repita este procedimiento (fase de adquisición) tres días seguidos.
       NOTA: Todos los experimentos descritos se realizaron en ratas Sprague Dawley macho. La duración de los diferentes módulos de entrenamiento puede diferir en ratas de diferentes cepas, sexos y vendedores.
2. Prueba de libre elección
   1. Limpie la caja de la escalera con una solución de ácido acético al 0,1%.
   2. Retire la escalera y llene los pozos de cada escalón con ocho gránulos de 45 mg.
   3. Coloca la rata en la caja de transporte.
   4. Transporta a la rata desde la jaula de casa hasta la caja de la escalera usando la caja de transporte.
   5. Coloca la rata en la caja de la escalera.
   6. Después de cinco minutos, saque al animal de la caja de la escalera y vuelva a colocarlo en la jaula de la casa usando la caja de transporte.
      Fíjate en la cantidad de gránulos que se comieron de la escalera derecha e izquierda.
   7. NOTA: Si los animales aún tienen problemas para agarrar los gránulos, agregue algunos más en la plataforma donde puedan alcanzarse fácilmente.
   8. Vuelva a llenar la escalera llenando los pozos de cada escalón con ocho gránulos de 45 mg.
   9. Limpie la caja de la escalera con una solución de ácido acético al 0,1% para el siguiente animal.
   10. Repita este procedimiento (fase de libre elección) tres días seguidos.
       nota: Los resultados presentados se obtuvieron mediante un entrenamiento realizado sin un período de descanso entre módulos. Algunos grupos prefieren un día de descanso para la consolidación, para apoyar el proceso de entrenamiento.
3. Prueba de elección forzada
   1. Limpie la caja de la escalera con una solución de ácido acético al 0,1%.
   2. Retire la escalera y llene los pozos de cada escalón de la escalera izquierda con ocho (tres primeros días del módulo) o cuatro (tres días consecutivos del módulo) gránulos de 45 mg.
      1. Realice la prueba de elección forzada en el lado donde ocurrirá el deterioro.
         nota: Realizamos la lesión de Parkinson en el hemisferio derecho y por lo tanto entrenamos selectivamente la pata izquierda.
   3. Coloca la rata en la caja de transporte.
   4. Transporta a la rata desde la jaula de casa hasta la caja de la escalera usando la caja de transporte.
   5. Coloca la rata en la caja de la escalera.
   6. Después de cinco minutos, saque al animal de la caja de la escalera y vuelva a colocarlo en la jaula de la casa usando la caja de transporte.
   7. Fíjate en la cantidad de pellets que se comieron de la escalera de la izquierda.
   8. Rellene la escalera llenando los pozos de cada escalón con ocho o cuatro gránulos de 45 mg (el número de gránulos depende del día de entrenamiento).
   9. Limpie la caja de la escalera con una solución de ácido acético al 0,1% para el siguiente animal.
   10. Repita este procedimiento (fase de elección forzada) seis días seguidos.
4. Adquisición de datos
   1. Realice el experimento como se describe para el módulo de elección forzada (cuatro perdigones en cada pozo de la escalera de la izquierda) en dos días consecutivos. Calcule la tasa de éxito (número de pellets consumidos) como media de los dos días.

Resultados

Figura 1: Configuración de la prueba de escalera. La caja de la escalera dispuesta con perdigones en la escalera izquierda. (A) vista lateral, (B) vista desde arriba.

Figura 2: Prueba de escalera. Una rata hemiparkinsoniana durante la prueba de escale...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Caja de escalera sin tapa	Glas Keil, Alemania		hecho a medida
Perdigones de precisión sin polvo, 45 mg	Bio Serv	F0021