Evaluación de la discapacidad motora en modelos de C. elegans mediante el ensayo de locomoción radial

Resumen

Fuente: Currey, H. N., et al. Evaluación del deterioro motor en modelos de esclerosis lateral amiotrófica de C. elegans. J. Vis. Exp. (2021).

Este video demuestra el uso de un ensayo de locomoción radial para evaluar la disfunción motora en C. elegans que expresan la proteína TDP-43 humana de tipo salvaje o mutante en ELA. Los gusanos con niveles variables de expresión de TDP-43 de tipo salvaje o mutante pueden arrastrarse, y su movimiento se mide por la distancia radial recorrida desde el punto central de la placa de ensayo. El ensayo distingue entre deficiencias motoras leves, moderadas y graves en función de la distancia recorrida por las diferentes cepas de C. elegans.

Protocolo

1. Ensayo de locomoción radial

1. Prepare placas de Petri de 100 mm o 150 mm de diámetro aproximadamente hasta la mitad llenas de medios de crecimiento de nematodos (NGM) y sembradas con un césped uniforme de bacterias OP50 para cubrir toda la superficie del agar.
2. Voltee las placas de ensayo NGM al revés y etiquete la parte inferior con un identificador para las cepas de C. elegans que se van a analizar, 2 placas por cepa (Figura 1A).
3. Haga un pequeño punto con el marcador en el centro de la placa invertida (Figura 1A).
4. Mientras trabaja con un microscopio de disección, tr....

Resultados

Figura 1: Flujo de trabajo del ensayo de locomoción radial. Los paneles A-E muestran los pasos generalizados del ensayo de locomoción radial. Los pasos son los siguientes: (A) Las placas NGM, con OP50 sembrado hasta los bordes, se preparan etiquetando y marcando el punto central, (B) los gusanos se colocan en el centro del agar como lo marca el punt.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
C. elegans	Centro de Genética de Caenorhabditis (CGC)	-	Adquiera sus cepas como desee, N2 es una cepa de control útil
Pipetas pasteur desechables, vidrio de borosilicato	VWR	14673-010	Pipeta de vidrio utilizada para crear un pico de gusano: sostenga la pipeta de vidrio en una mano y ~ 1 "de alambre de platino (sostenido por alicates) en la otra sobre una llama para unir.
Placas de Petri desechables, 35x10mm	VWR	10799-192	Placas de ensayo para el sistema de imágenes WormLab
Placas de Petri desechables, 60x15mm	VWR	25384-090	Placas de culata para lombrices
Placas de Petri desechables, 100x15mm	VWR	25384-302	placa de ensayo de locomoción radial estándar
Placas de Petri desechables, 150x15mm	VWR	25384-326	Placa de ensayo de locomoción radial de marco de tiempo más largo
Microscopio de disección	Leica	M80	Alcance para el mantenimiento de gusanos y la configuración de ensayos de locomoción radial
Rotuladores de punta fina	VWR	52877-810	Necesita al menos 2 colores para los ensayos de locomoción radial. Se requieren puntas finas para mayor precisión.
Escáner de cama plana	Amazonas	Epson Perfection V850	Opcional para el ensayo de locomoción radial. El protocolo asume una resolución de 300 ppp, la mayoría de los escáneres funcionarían bien
NGM (Medio de crecimiento de nematodos)	VWR	76347-412	Medio utilizado para cultivar C. elegans. Se puede hacer desde cero, véase WormBook: Mantenimiento de C. elegans
Bacterias OP50	Centro de Genética de Caenorhabditis (CGC)	OP50	Fuente primaria de alimento para C. elegans
P1000 pipeta	VWR	76207-552	Pipettor, usado en el ensayo de natación
P1000 Consejos	VWR	83007-384	Consejos para la pipeta, utilizada en el ensayo de natación
Alambre de platino, 0,2032 mm de diámetro	VWR	BT136585-5M	Alambre de platino de calibre fino utilizado para crear un pico de gusano: sostenga la pipeta de vidrio en una mano y ~ 1 "de alambre de platino (sostenido por alicates) en la otra sobre una llama para unir.
Regla	VWR	56510-001	Necesidad de puntuar los ensayos de locomoción radial
ImagenJ	NIH	-	Software libre opcional proporcionado por los NIH - https://imagej.nih.gov/ij/
Sistema de imágenes WormLab	MBF Biociencia	WormLab	El sistema de imágenes incluye Hardware de WormLab (campo claro escenario, cámara y carcasa) y el software WormLab. https:// www.mbfbioscience.com/wormlabimaging- sistema