Denervación simpática de las arterias renales en un modelo de ratón de hipertensión inducida por angiotensina II

Resumen

Fuente: Wang, M., et al., Hipertensión mitigada por la denervación renal mejorada inducida por la infusión de angiotensina II. J. Vis. Exp. (2022)

Este video muestra un procedimiento para la denervación simpática de la arteria renal en un modelo de ratón hipertensivo inducido por angiotensina II, utilizando fenol para interrumpir la función nerviosa simpática y reducir la presión arterial.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Denervación renal bilateral

1. Seleccione los ratones con presión arterial (PA) elevada ≥140/90 mmHg o un aumento del 25% en la PA sistólica/PA diastólica, 1 semana después de la infusión de Ang II.
2. Registre el peso del animal antes de la cirugía y elija animales con un peso mínimo de 24 g para la cirugía de denervación renal.
3. Anestesiar a los ratones con pentobarbital sódico. Confirme la profundidad de la anestesia con un reflejo negativo de pellizco de los dedos del pie.
4. Retira el vello del abdomen con una afeitadora. Realice este procedimiento con cuidado y minuciosidad para evitar cualquier contaminación quirúrgica.
5. Coloque a los ratones en la mesa de operaciones, manteniendo el abdomen erguido, y fije sus extremidades con cinta adhesiva. Desinfectar la piel abdominal con povidona yodada, seguido de tres toallitas con etanol al 70%.
6. Realice una incisión abdominal de 2 cm en la línea media ventral con una hoja de bisturí. Retirar el intestino con una gasa empapada en solución salina a 37 °C para exponer la arteria renal izquierda. Disecciona la grasa de la arteria renal con pinzas curvas con cuidadosa pero sin rodeos. (Figura 1A-C).
7. Corte el papel de pesaje en un rectángulo del mismo tamaño que la arteria renal con unas tijeras afiladas estériles. Como referencia, corte el papel de pesaje del mismo tamaño que se muestra en la línea punteada en la Figura 1C.
   NOTA: Es una parte fundamental de la cirugía tratar de cortar varios pedazos del papel de pesaje a la vez para mantener la misma forma.
8. Sumerja el papel de pesaje en una solución de fenol/etanol al 10% durante al menos 30 s. Cubra la superficie de la arteria renal izquierda y envuelva el recipiente con el papel de pesaje, manteniéndolo durante 2 minutos (Figura 1D). Use una gasa para proteger los tejidos circundantes y evitar que el papel de pesaje toque el riñón y el intestino circundantes.
   nota: La solución de fenol es estable en tubos de plástico, pero no en viales de vidrio. Por lo tanto, la solución debe estar recién preparada para cada experimento.
9. Realice el mismo procedimiento para la arteria renal derecha. Realice la cirugía simulada con papel de pesaje sumergido en solución salina.
10. Reposicione los músculos a su posición inicial y cierre el peritoneo con suturas Vicryl 6-0 en una sutura interrumpida. A continuación, cierre la piel con suturas de nylon 4-0 interrumpidas. Monitoree a todos los ratones hasta que estén completamente recuperados.

2. Cuidados postoperatorios

1. Aplique povidona yodada en la incisión y coloque al animal en una manta eléctrica caliente para su recuperación y seguimiento postoperatorio.
2. Monitoree a los ratones dos veces al día para evaluar si hay enrojecimiento, hinchazón y dolor o infección abdominal. Administrar meloxicam (0,5 mg/kg, SC) a todos los ratones aproximadamente 1 h antes y 24 h después del procedimiento RDN.

Resultados

Figura 1: Procedimiento de RDN con papel de pesaje. (A,B) Imágenes anatómicas de la arteria renal de ratones C57BL/6 (ex vivo). (C) La parte dentro de las dos líneas punteadas se refiere al área cubierta por el papel de pesaje. (D) Cubrir la superficie de la arteria renal bilateral con el papel de pesaje adecuado sumergido en una solución d...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Angiotensina II	Sangon Biotech	CAS:4474-91-3	Para hacer un modelo de animol hipertensivo
Análisis de la presión arterial	Visitech Systems	BP-2000	Medir la presión arterial de ratones
Minibomba osmótica	Corporación DURECT	CA 95014	Para rellenar con Angiotensina II
Papel de pesaje	Sangon Biotech	F512112	Destruir el nervio renal con papel de pesaje sumergido con fenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.