Una técnica de ablación guiada estereotácticamente para la extirpación de la corteza auditiva en ratas

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación de la rata

NOTA: Realizamos los experimentos en ratas macho para evitar cualquier cambio hormonal.

1. Anestesiar al animal con una mezcla de clorhidrato de ketamina (30 mg/kg) y clorhidrato de xilacina (5 mg/kg) inyectada por vía intramuscular; con esta dosis, la rata debe ser anestesiada profundamente durante aproximadamente 1 h.
2. Pellizca el dedo del pie de la rata; la ausencia de un reflejo de retirada indica que el animal está completamente inconsciente. Si la rata responde al pellizco, administre anestesia suplementaria a un tercio de la dosis inicial.
3. Afeitar el cuero cabelludo y desinfectar la zona quirúrgica con povidona yodada.
4. Coloque al animal sobre una almohadilla térmica para mantener una temperatura de 38 °C y estabilice la cabeza del animal en un marco estereotáxico utilizando dos barras para las orejas y una barra de mordida. Tenga cuidado para evitar perforar la membrana timpánica con las barras de la oreja.
5. Proteja los ojos aplicando una gota de gel oftálmico o suero salino en cada ojo.

2. Ubicación de la CA en el hueso temporal de la rata

1. Con un bisturí, haga una incisión a lo largo de la línea media para exponer el cráneo y retraer el periostio que cubre la superficie del cráneo.
2. Use una punta de algodón estéril para eliminar suavemente la sangre que cubre la superficie del cráneo para visualizar bregma, lambda e interaural 0 de acuerdo con el atlas de Paxinos y Watson del cerebro de rata.
3. Haz una incisión en el músculo temporal cerca de su inserción dorsal en el cráneo con un bisturí. Tire del músculo con una aguja y material de sutura y fije el material de sutura al marco estereotáctico; Esto expondrá el hueso temporal. Si se produce sangrado, enjuague con solución salina estéril fría.
4. Coloque una aguja recta estéril en el micromanipulador estereotáctico, asegurándose de que esté completamente asegurada.
5. Baje lentamente la aguja hasta que esté justo por encima de la superficie del cráneo, de modo que la punta de la aguja se ajuste a 0 interaural. Establezca este punto como cero y determine las coordenadas desde este punto.
6. Dependiendo del área cerebral de interés, varíe las coordenadas estereotácticas. Determine estas coordenadas utilizando el atlas de Paxinos y Watson del cerebro de rata. Una vez determinadas las coordenadas, mueva la aguja para que coincida con esas coordenadas.
7. Diríjase a la CA utilizando las coordenadas de los cuatro puntos siguientes: A: anteroposterior (A/P) = -5,8 mm, mediolateral (M/L) = +/- 6,4 mm; B: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 6,4 mm; C: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 8,67 mm; D: A/P= -5,8 mm, M/L= +/- 8,67 mm. Baje la aguja justo por encima del hueso temporal para visualizar cada uno de estos cuatro puntos. Con un rotulador, marque los puntos en el hueso temporal y conéctelos para dibujar un rectángulo; el rectángulo servirá como guía para abrir una ventana en el hueso (Figura 1).

3. Exposición quirúrgica del CA

1. Abra la ventana con un taladro eléctrico y una broca pequeña (0,6 mm Ø). Perfora el perímetro del rectángulo a 8.000 rpm hasta que el hueso ceda. Enfríe la superficie de perforación enjuagando con solución salina estéril fría para evitar daños en las estructuras subcorticales. Cuando el hueso cede, se puede detectar una caída en la resistencia. Ten cuidado de no perforar el cerebro.
2. Cuando los bordes estén sueltos, levante el hueso que lo cubre con pinzas finas y guárdelo en solución salina fría y estéril.

4. Ablación de la AC

1. Con un microscopio quirúrgico (10X), corte suavemente las meninges con un bisturí microquirúrgico y retírelas con dos pinzas de punta fina. Si se produce sangrado, enjuague con solución salina estéril fría.
2. Aspire suavemente el CA con un dispositivo de succión quirúrgico (presión -0,24 bar) acoplado a una aguja estéril de punta roma de 20 G. Este punto es crítico y debe realizarse con mucho cuidado: aspire solo las seis capas corticales y no la sustancia blanca subyacente.
3. Aspire hasta que las arterias perforantes dejen de sangrar.
4. Una vez finalizada la aspiración, cubrir la zona lesionada con el hueso extraído y aplicar una gasa hemostática reabsorbible.
5. Deje que el músculo temporal recupere su posición original y luego sutura la piel con pinzas para heridas (9 mm). Aplícate un ungüento antibiótico. Continúe aplicando ungüento en la herida dos veces al día durante tres días.
   NOTA: Cada aplicación consiste en una fina capa aplicada sobre la herida.
6. Inyectar buprenorfina por vía subcutánea en el dorso de la rata (0,05 mg/kg) como analgésico 1 h después de la cirugía, y luego cada 8 h durante 72 h.
7. Mantenga al animal en la almohadilla térmica hasta que se despierte y devuélvalo a su jaula de alojamiento para que se recupere.

Figura 1: Imágenes del hueso temporal de rata en tres pasos quirúrgicos diferentes. (A) Transferencia de las coordenadas estereotáxicas del CA al hueso temporal. Las coordenadas de los cuatro puntos son: A: A/P= -5,8 mm, M/L= +/- 6,4 mm; B: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 6,4 mm; C: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 8,67 mm; D: A/P= -5.8 mm, M/L= +/- 8.67 mm. (B) Las coordenadas se utilizan como referencia para dibujar un rectángulo en la superficie del hueso temporal que guiará la apertura de una ventana. (C) Muestra la ventana abierta en el hueso después de perforar. Las meninges con vasos sanguíneos se pueden observar en la superficie del cerebro. R: rostral, D: dorsal.