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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Establecimiento de un modelo unilateral de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media (MCAO/R) en ratas
NOTA: Durante la operación, utilice las micropinzas suavemente para evitar la rotura del vaso sanguíneo. Evite dañar los nervios y otros vasos sanguíneos en el cuello de la rata cuando el vaso esté aislado. Se debe tener cuidado de presentar una técnica aséptica adecuada para todos los procedimientos quirúrgicos de supervivencia. La técnica que se ilustra más adelante en el video debe practicarse durante todo el procedimiento.
- Durante toda la cirugía, mantenga la temperatura corporal de las ratas entre 37,0 ± 0,5 °C en un termostato para animales pequeños. Prepare cuatro suturas 5-0 de 6 cm.
- Ajuste el caudal de oxígeno de una máquina de anestesia para animales pequeños (con un dispositivo de tratamiento de gases residuales) a 0,4-0,6 L/min y la concentración de isoflurano al 5%. Coloque la rata en la máquina de anestesia.
- Después de que el animal se haya desmayado, coloque a la rata en una mesa de fijación quirúrgica. Conecte la boca de la rata a la máscara de la máquina de anestesia (el caudal de oxígeno permanece inalterado; ajuste la concentración de isoflurano para que sea del 3%). Confirme que el animal ha entrado en anestesia profunda observando la falta de tensión en las extremidades, los reflejos corneales y el dolor.
- Fije sus extremidades para que queden sobre la mesa de operaciones con vendajes de papel (u otras herramientas).
- Retire la capa del cuello con una afeitadora eléctrica y esterilice con alcohol al 75% (el yodóforo es mejor). Fija la boca de la rata con un gancho.
- Cortar 2-3 cm a lo largo de la forma longitudinal central del cuello con unas tijeras oftálmicas.
- Separe la arteria carótida común. Separe el músculo subcutáneo con pinzas oftálmicas. Use un retractor casero para exponer completamente el campo de visión. Después de separar el músculo anterior de la tráquea con pinzas oftálmicas, separar a lo largo del tendón esternocleidomastoideo derecho hasta que la arteria carótida común sea visible.
- Aísle la arteria carótida común, la arteria carótida externa y la arteria carótida interna con pinzas oftálmicas. Ligue la arteria carótida común (nudo duro), la arteria carótida externa lejos del extremo cardíaco (nudo duro) y la arteria carótida interna (nudo suelto) con suturas 5-0. Cubra la arteria carótida externa cerca del extremo cardíaco con suturas 5-0.
- Inserte un perno roscado. Corte una pequeña abertura en la arteria carótida externa con unas tijeras oftálmicas e inserte suavemente un perno roscado. Ligue la sutura de la arteria carótida externa que ha estado en un nudo suelto y corte la arteria carótida externa.
- Afloje el nudo suelto de la arteria carótida interna y continúe insertando el perno roscado hasta el comienzo de la arteria cerebral media (sutura marcada). Luego, corte el perno de rosca expuesto.
- Una vez alcanzado el tiempo de isquemia (2-3 h), fije la fractura de la arteria carótida externa con una micropinza y extraiga suavemente el perno de la rosca con otra micropinza. Cuando el extremo delantero del perno roscado esté completamente retirado de la arteria carótida interna, ligar la arteria carótida externa que estaba revestida con suturas 5-0 y luego saque el perno roscado por completo.
- Afloje la arteria carótida común y embadurne ~ 50,000 U de polvo de penicilina sódica en la superficie de la herida para prevenir la infección. Sutura los músculos subcutáneos y la piel con 4 suturas.
- Administre ~ 0.2 mL de solución salina estéril a la rata por vía oral usando una jeringa de 1 mL (la inyección de SQ-PEN es mejor) para prevenir la escasez de agua postoperatoria después de volver a colocar a la rata en la jaula.