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Artículo de método

Evaluación de la contracción muscular con el tratamiento con bloqueadores neuromusculares

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⸱

8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Lin, C. U., et al., Unión neuromuscular in vitro inducida a partir de células madre pluripotentes inducidas humanas. J. Vis. Exp. (2020)

Este video muestra la evaluación del músculo utilizando neuronas motoras cultivadas, células de Schwann y miotubos, seguido de un tratamiento con un bloqueador neuromuscular para inhibir la contracción. Los gráficos de movimiento de tiempo codificados por colores muestran un gráfico de movimiento de tiempo codificado por colores. El rojo indica el movimiento más rápido y el azul indica el más lento.

Protocolo

1. Tratamiento de contracción muscular y curare

  1. Para desencadenar la contracción del miotubo, agregue 25 mM de cloruro de calcio (CaCl2) al medio de cultivo. El movimiento de los miotubos se puede observar en 1\u20122 min.
  2. Coloque la placa de 6 pocillos en la platina de un microscopio invertido. Grabe una película de la contracción del miotubo mediante microscopía de células vivas.
  3. Para detener la contracción del miotubo, agregue curare al medio de cultivo (300 ng/mL). A continuación, graba la película como paso 1.2.
  4. Abra el archivo de película con el software de análisis vectorial de movimiento, luego haga clic en el botón Análisis de movimiento para analizar la película.
    NOTA: La contracción de los miotubos se muestra como un gráfico de tiempo-movimiento. Las películas están codificadas por colores para mostrar la velocidad de movimiento de los miotubos. Las señales brillantes codificadas por colores indican los movimientos de los miotubos, donde el color rojo muestra la velocidad de movimiento más rápida y el color azul muestra la velocidad de movimiento más lenta.

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Divulgaciones

No se declaran conflictos de intereses.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Medio, factores de crecimiento y reactivosArtículoMarcaGato. Número
B27, GibcoGibco12587-001
BDNFSistemas de investigación y desarrollo248-BD
ECM, Matrigel (factor de crecimiento reducido)Corning356230
GDNFSistemas de investigación y desarrollo212-GD
Recubridor de ionesJEOLJEC3000FC
Microscopía de células vivasNikonMicroscopio Eclipse Ti
Software de análisis vectorial de movimientoSonySI8000
N2, GibcoGibco17502-048
Medio neurobasalGibco21103-049
NT3Sistemas de investigación y desarrollo267-N3

Etiquetas

Unión neuromuscularcloruro de calciomicroscopía de células vivastiempo-movimiento codificado por colorescontracción de miotubosreceptores de acetilcolinamicroscopio invertidotratamiento con curare