Tinción de fluorescencia de células de cresta neural cultivadas en hidrogeles de diversa rigidez

Resumen

Fuente: Le, T. P., et al., Un sistema optimizado de O9-1/hidrogel para estudiar señales mecánicas en células de cresta neural. J. Vis. Exp. (2021)

En este video, describimos el procedimiento para realizar la tinción de fluorescencia utilizando microscopía de fluorescencia para demostrar la tinción de faloidina de células de cresta neural cultivadas en hidrogeles de diferente rigidez para visualizar y analizar la organización del citoesqueleto.

Protocolo

1. Análisis molecular de la rigidez mediante tinción de inmunofluorescencia

1. Use pinzas para transportar el cubreobjetos a una nueva placa para minimizar las señales falsas de las células cultivadas directamente en la placa. Lave las células con 500 μL de PBS estéril tres veces para eliminar las células muertas y cualquier medio de cultivo restante.
2. Fije las celdas con 500 μL de paraformaldehído (PFA) al 4% durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, vuelva a lavar las células tres veces con 500 μL de PBS/pocillo durante 2 minutos cada una.
   NOTA: Almacenar a 4 °C para una parada de procedimie....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
2 mm #1 Corning 0211 Cubreobjetos de vidrio	Chemglass Ciencias de la Vida	CLS-1763-012
25 mm #1 Corning 0211 Cubreobjetos de vidrio	Chemglass Ciencias de la Vida	CLS-1763-025
Placa de cultivo celular de 4 pocillos	Termo Científico	179830
4% Paraformaldehído	Sigma Aldrich	J61899-AP
40% Acrilamida	Sigma Aldrich	A4058
Alexa Fluor 488 Faloidina	Thermo Fisher	A12379
Colágeno tipo I (100mg)	Corning	354236
DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol, diclorhidrato)	Thermo Fisher	D1306
Suero de burro	Sigma Aldrich	D9663
Estéril 1x PBS	Hyclone	SH30256.02
Microscopio de fluorescencia	Leica