Procesamiento del cerebro de un ratón para su análisis posterior

Resumen

Fuente: Wager-Miller, J. et al. Colección de regiones congeladas del cerebro de roedores para análisis posteriores. J. Vis. Exp (2020)

Este video muestra un protocolo detallado paso a paso para preparar secciones de tejido cerebral de ratón congelado para análisis posteriores.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

1. Almacenamiento de cerebros

1. Extraiga rápidamente los cerebros de ratones adultos CD1 de tipo salvaje sacrificados que pesen aproximadamente 30 g utilizando un enfoque convencional y congele rápidamente durante 60 segundos en nitrógeno líquido o isopentano preenfriado con hielo seco.
2. Guarde los cerebros congelados a -80 °C en papel de aluminio o tubos cónicos hasta su uso.

2. Preparando la matriz cerebral....

Resultados

Figura 1: Preparación de superficies de trabajo congeladas. (A) Un bloque cerebral se coloca en una pila de paquetes de gel dentro de una caja aislada y luego se intercala entre dos paquetes de gel adicionales. El papel de aluminio se empaqueta en cada extremo del bloque para facilitar el enfriamiento durante el seccionado. A continuación, la caja se enfría durante la noche a -20 °C........

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
0.5 mm Matrices cerebrales coronales de ratón	Braintree Scientific	BS-SS 505C	Bloque de corte
0.5 mm Matrices de cerebro coronal de rata	Braintree Scientific	BS-SS 705C	Bloque de corte
Punzón de biopsia de 1,0 mm con émbolo	Ciencias de la Microscopía Electrónica	69031-01
Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL	Punto Scientific	229443	Para almacenar ROIs congelados
Punzón de biopsia de 1,5 mm con émbolo	Ciencias de la Microscopía Electrónica	69031-02
Punzón de biopsia de 2,0 mm con émbolo	Ciencias de la Microscopía Electrónica	69031-03
4-12% NuPage gel	Invitrogen	NPO323BOX	gel de gradiente de proteínas
Sistema de bioanálisis	Agilent	2100	sistema de análisis de ARN
Amoladora de pañuelos Mounce	Millipore Sigma	D8938	Homogeneizador de tejido de vidrio
Fibra-Lite	Dolan-Jenner Industries Inc.	Modelo 180	Lámpara fresca
Placas de vidrio	LabRepCo	11074010
Cuchillas de perfil bajo	Sakura Finetek USA Inc.	4689