Técnica para inducir convulsiones postraumáticas en un modelo de ratón a través de una lesión traumática por pérdida de peso

Resumen

Fuente: Shandra, O. et al., Inducción de epilepsia postraumática en un modelo de ratón de lesión cerebral traumática difusa repetitiva. J. Vis. Exp. (2020)

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Procedimiento de caída de peso

1. Coloque el mouse en una cámara de inducción. Ajuste el flujo de oxígeno y vacío a 1 L/min y el nivel de gas isoflurano a 3%-5%. Anestesiar al ratón durante 5 min.
2. Retire el mouse de la cámara de inducción y colóquelo sobre una almohadilla de espuma. Pruebe la ausencia de una respuesta a un pellizco en el dedo del pie o la cola.
3. Administrar un analgésico (0,1 mg/kg de buprenorfina) por vía subcutánea. Si la cirugía de electroencefalografía (EEG) se realiza ese mismo día, administrar la buprenorfina por vía subcutánea en combinación con el antiinflamatorio no esteroideo carprofeno (5 mg/kg).
4. Administrar la solución de lactato sódico (3 μL por gramo del peso del animal) por vía subcutánea antes o después del último impacto. La solución de lactato de sodio se puede mezclar con los analgésicos para una administración rápida en una sola inyección.
   nota: La solución de lactato de sodio contiene una mezcla de cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio y lactato de sodio en agua. Este paso ayuda a reemplazar líquidos y electrolitos, lo que ayuda a la recuperación.
5. Coloque la cabeza del ratón debajo del tubo de caída de peso (Figura 1A) y coloque un disco plano de acero inoxidable (1,3 cm de diámetro, 1 mm de grosor y 880 mg de peso) en el centro de la cabeza, entre la línea de los ojos y las orejas><. nota: Este disco difunde el impacto a través de la superficie del cráneo (Figura 1B).
6. Retire el pasador en el tubo de caída de peso para liberar la barra de peso de 100 g desde una altura de 50 cm. Para inducir la lesión simulada para los ratones de control, retire la varilla de peso del tubo para evitar la liberación accidental del pin y la caída de peso><. nota: La cabeza del animal debe colocarse plana, de modo que la varilla caiga libremente sobre toda la superficie del disco.
7. Coloque al animal inconsciente boca arriba para su recuperación sobre una almohadilla térmica cubierta con una toalla absorbente estéril con forro de polietileno. El tiempo de recuperación del reflejo de enderezamiento (es decir, el tiempo que tarda el ratón en enderezarse desde atrás) se puede medir como una lectura del tiempo que pasa inconsciente.

Resultados

Figura 1: Modelo de ratón de traumatismo craneoencefálico (TCE) difuso repetitivo. (A) Dispositivo de caída de peso. (a1) Tubo de caída de peso. (a2) Una caña de 100 g de peso. (a3) Pasador que sujeta la varilla. (a4) Cuerda para levantar la caña si cambias la altura o quitas la caña del tubo de caída de peso. (

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Buprenorfina	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., Spring Valley, Nueva York, Estados Unidos	60969
C57BL/6 ratones	Harlan/Envigo Laboratorios Inc		macho, 12-16 semanas de edad
Ratones C57BL/6	El Laboratorio Jackson		hombre, 12-16 semanas de edad
Carprofeno	Zoetis Services LLC, Parsippany, Nueva Jersey, Estados Unidos	26357	NOTA: este medicamento se agrega durante la caída de peso solo si la implantación de electrodos estereotácticos se realizará el mismo día
Fluriso líquido para anestesia inhalatoria	MWI Veterinary Supply Co., Estados Unidos	502017
Disco de acero inoxidable			Hecho a medida
Almohadillas estériles de toallas absorbentes con forro de polietileno	Cardinal Health, Estados Unidos	3520