Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.
NOTA: El protocolo describe un procedimiento de corte cerebral bihemisférico simétrico para la evaluación postmortem del cerebro finalizado para estudios neuropatológicos en humanos. Se excluirán las descripciones detalladas de los aparatos, instrumentos, materiales y suministros necesarios para el corte del cerebro humano. Los materiales y suministros para las disecciones cerebrales se seleccionan a discreción del investigador individual y se basan en las herramientas de autopsia permitidas o aprobadas en cada institución de investigación. El conjunto mínimo de herramientas y materiales necesarios para este procedimiento se describe en la Tabla de Materiales/Equipos. Los procedimientos de corte específicos y las precauciones para las sospechas de enfermedades cerebrales transmisibles, como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en humanos, están fuera de los objetivos de este manuscrito y están disponibles en otras fuentes.
1. Corte de cerebro bihemisférico simétrico
Nota: Asegúrese de que el cerebro haya recibido la fijación tisular necesaria (utilizando, por ejemplo, formalina al 10% tamponada en neutro) durante un período de dos a tres semanas, dependiendo de las condiciones periagonales, metabólicas (es decir, pH) y de conservación de tejidos (es decir, temperatura). Sin embargo, para los estudios de correlación imagenopatología, se ha sugerido un período de fijación más largo (>5,4 semanas).
- Coloque el cerebro sobre una superficie plana frente al investigador, con los polos frontales dirigidos en la dirección opuesta con respecto al investigador.
- Coloque el cerebro para permitir la visualización completa y clara de todas las circunvoluciones corticales y surcos de todo el cerebro (Figura 1a).
- En primer lugar, busque anomalías meníngeas, asimetrías hemisféricas macroscópicas (posibles indicadores de fenómenos hemisféricos focales, lobares o generalizados de atrofia), lesiones macroscópicas del tejido (es decir, tumores o hernias), malformaciones congénitas, anomalías de los vasos y cualquier otra posible anomalía o presentación inusual de la superficie cerebral
nota: Para obtener descripciones detalladas de cómo evaluar un cerebro humano, consulte los libros de texto de neuropatología y los manuales de autopsia disponibles en el mercado.
2. Secuencia de protocolo
- Mire los polos frontales lejos del investigador, con los aspectos superficiales de los hemisferios (telencéfalo) mirando hacia el investigador. Tome tantas fotografías digitales como sean necesarias en cada caso particular para documentar las posibles macroanomalías y tener en cuenta las posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y posteriores al corte. Pida a un asistente de investigación que tome fotografías digitales perpendicularmente al cerebro para capturar toda la superficie cortical (Figura 1a - c).
- Marque los giros corticales pre y postcentrales con tinta o agujas de colores antes de cortar el cerebro (Figura 1b).
nota: Este procedimiento facilita un reconocimiento más inmediato de las cortezas primarias motoras y somatosensoriales después del corte.
- Gire el cerebro 180 grados mientras lo mantiene mirando en la misma dirección (es decir, los polos frontales en dirección opuesta al investigador). Inspecciona cuidadosamente la base del cerebro. Preste especial atención a las condiciones del sistema cerebrovascular (es decir, las arterias basilar y vertebral y el círculo de Willis) y los nervios craneales en sus niveles de salida/entrada del tronco encefálico. Manejar los bulbos y tractos olfativos con especial cuidado para evitar la laceración de los tejidos debido a su extrema fragilidad.
- Tome tantas fotografías digitales como sean necesarias en cada caso particular para documentar las posibles macroanomalías y tener en cuenta las posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y posteriores al corte. Pida a un asistente de investigación que tome fotografías digitales perpendiculares al cerebro para capturar la totalidad de las superficies corticales y del tronco encefálico.
- Mirando hacia la base del cerebro y con un bisturí, corte el tronco encefálico transversalmente a la altura de la parte superior de la protuberancia (lo más cerca posible de la base del cerebro). Inspeccione cuidadosamente el SN (es decir, si está pálido) y otras estructuras vecinas. Tome nota, posiblemente usando un dispositivo de grabación de audio, de cualquier apariencia inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.
- De nuevo, gire el cerebro 180 grados y, con un cuchillo afilado, separe los dos hemisferios cortando el cuerpo calloso centralmente a través de la fisura longitudinal medial y siguiendo una dirección fronto-occipital. Inspeccione cada lado de cada hemisferio en busca de posibles anomalías (por ejemplo, agrandamiento ventricular, malformaciones, reblandecimiento de tejidos, tumores, etc.). Véase la figura 2a.
- Tome tantas imágenes digitales como sean necesarias en cada caso particular para documentar las posibles macro-anomalías y tener en cuenta las posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y posteriores al corte. Pídele a un asistente de investigación que tome fotografías digitales perpendicularmente al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Fíjate en cualquier característica cerebral inusual en comparación con un cerebro normal.
- Coloque los dos hemisferios planos, acostados sobre sus lados mediales, con los lóbulos frontales hacia afuera del investigador, como se muestra en la Figura 2b. Colóquelos de manera que sus centros se toquen (también en caso de marcada asimetría hemisférica).
- Con un cuchillo afilado, corte manualmente a través de ambos hemisferios cerebrales, comenzando en los polos frontales y avanzando hacia los polos occipitales a lo largo de toda la longitud de los hemisferios. Obtenga dos series de bloques de tejido cerebral de 1 cm de espesor (alrededor de 18 losas para cada hemisferio).
- Coloque las placas cerebrales en una secuencia anatómicamente organizada (dirección fronto-occipital) en una superficie plana separada. Utilice una superficie blanca con una regla impresa en ella para obtener un mejor contraste al fotografiar. Muestre las dos series de losas cerebrales de una manera anatómicamente simétrica (dirección fronto-occipital), asegurándose de que sus superficies coronales sean visibles para la inspección ocular directa y la fotografía digital (Figura 3a). Utilice superficies de corte con cuadrículas milimétricas impresas en ambos lados para localizar las estructuras cerebrales, los tamaños y las posibles anomalías de una manera más precisa.
- Tome tantas fotografías digitales como sean necesarias en cada caso particular para documentar las posibles macroanomalías y tener en cuenta las posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y posteriores al corte. Pídele a un asistente de investigación que tome fotografías digitales perpendicularmente al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Tome notas (posiblemente usando un dispositivo de grabación de audio) de cualquier aspecto inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.
- Con un bisturí afilado, diseccione manualmente bloques rectangulares más pequeños de tejido cerebral para cada región cerebral establecida. Seguir el esquema de recolección de la región cerebral propuesto descrito en la Tabla 1.
- Coloque cada bloque de tejido en histocassettes marcados por separado.
nota: Cada bloque de tejido encefálico debe cortarse para que se ajuste, en la medida de lo posible, al volumen máximo estándar del histocassette (30 x 20 x 4 mm3).
- Etiquete los histocassettes utilizando un código de desidentificación para cada caso y utilizando identificadores neuroanatómicos específicos (no utilice letras o números aleatorios para diferentes cerebros; más bien, utilice siempre los mismos nombres anatómicos regionales o los números correspondientes, como se muestra en la Tabla 1). Cree códigos de desidentificación, por ejemplo, generando números aleatorios o semialeatorios para cada caso (es decir, BRC 130, donde 5B se queda para Cerebro, R se queda para Recurso, C se queda para Centro y 130 es una accesión progresiva o AD160001, donde AD significa "estudio de la enfermedad de Alzheimer", 16 es el año en que se realizó la autopsia (2016), y 0001 un número de espécimen de adhesión progresiva).
nota: Este paso es muy útil para futuros investigadores. Mantenga una leyenda y especifique el hemisferio (L = hemisferio izquierdo, R = hemisferio derecho). Utilice dos colores diferentes de histocassettes, estableciendo un color específico para cada hemisferio.
- Tomar tantas fotografías digitales como sean necesarias en cada caso particular para documentar las posibles macroanomalías y tener en cuenta las posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y posteriores al corte. Pídele a un asistente de investigación que tome fotografías digitales perpendicularmente al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Toma nota de cualquier característica inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.
- Tome fotografías digitales (tantas como sea necesario o deseado) de todo el cerebro cortado y de los histocassettes asociados.
Tabla 1. Esquema de corte bihemisférico. Esta tabla muestra la única área anatómica a diseccionar en los hemisferios izquierdo y derecho de cada cerebro. El corte simétrico bihemisférico se puede realizar en cerebros frescos y fijos.
| Región neuroanatómica | etiqueta | Fijo a la izquierda | Fijo a la derecha | Quedó congelado | Derecho Congelado |
| Bulbo olfatorio | Ob | | | | |
| Corteza frontal polar | Pfc | | | | |
| Circunvolución frontal media | Mfg | | | | |
| Circunvolución orbitofrontal | OFG | | | | |
| Lóbulo inferior de la corteza parietal | PCLI | | | | |
| Corteza temporal superior | Stc | | | | |
| Corteza temporal media | Mcc | | | | |
| Corteza cingulada anterior | Acc | | | | |
| Corteza cingulada posterior | Pcc | | | | |
| Circunvolución precentral (Coloque un alfiler antes de cortar) | PrCRG | | | | |
| Circunvolución post-central (Poner un alfiler antes de cortar) | PoCRG | | | | |
| Circunvolución occipital (incluyendo las áreas de Broadmann 17 y 18) | Oc | | | | |
| amígdala | Amy | | | | |
| Ganglios basales a nivel de la comisura anterior con núcleo basal de Meynert | BGMY | | | | |
| Thallamus y subthallamus | TH-STH | | | | |
| Cuerpos mamilares e hipotálamo | MAM+HIPO | | | | |
| Núcleos basales de forbrana | Bf | | | | |
| Hipocampo anterior | ah | | | | |
| Hipocampo posterior (a nivel lateral del cuerpo geniculado), incluyendo la corteza entorrinal y la corteza temporal inferior | PH+EC+ITC | | | | |
| Corteza cerebelosa y núcleo dentado | CRBDe | | | | |
| Mesencéfalo (incluida la Substantia nigra) | MESSN | | | | |
| Pons incluyendo Locus coeruleus (LC) | pons | | | | |
| Médula oblongata Médula incluyendo DMV | MObi | | | | |
| Médula espinal | MSpi | | | | |
| Médula espinal superior | Sc | | | | |
| Dura Madre | decímetro | | | | |
