Evaluación del efecto de la infusión continua de fármacos en el cerebro de ratón sobre los niveles periféricos de glucosa

Resumen

Fuente: Ajoy, R., et. al. Estudio de la señal de insulina hipotalámica a la intolerancia periférica a la glucosa con un sistema de infusión continua de fármacos en el cerebro de ratón. J. Vis. Exp. (2018)

Este video demuestra el efecto de la infusión continua de medicamentos en el cerebro del ratón sobre los niveles de glucosa en la sangre. El metabolismo de la glucosa se evalúa mediante la recolección de sangre de la cola de un ratón en ayunas y la medición de los niveles de glucosa antes y después de la administración oral de glucosa. La tolerancia a la insulina se evalúa inyectando insulina en el ratón, con niveles de glucosa registrados a intervalos específicos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación de sistemas de infusión con bomba microosmótica

NOTA: Prepare la bomba, el tampón de líquido cefalorraquídeo artificial (aCSF) y el fármaco (solución de proteína Met-CCL5/RANTES (10 ng/mL en aCSF)) en condiciones estériles utilizando tampones filtrados con filtros de 0,2 μm y realice todos los procedimientos bajo la cubierta de cultivo con guantes. Los procedimientos quirúrgicos se llevan a c....

Resultados

Figura 1. Procedimiento quirúrgico de preparación e implantación de bombas osmóticas en ratón. (A) El kit de infusión cerebral y la preparación de la bomba perfundidos con una solución de fármaco. Las flechas rojas indican que los tubos del catéter están llenos de líquido. (B) Fije y monte la cabeza del ratón en el aparato estereotáctico. (C) Separe.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Adhesivo para tejidos Vetbond	3M	#1049SB	El pegamento utilizado para sellar el sitio de la lesión en la cabeza del ratón
Adhesivo instantáneo LOCTITE 454	Corporación Durect	#8670	El pegamento utilizado para fijar la aguja en el cráneo del ratón
Bomba micro-osmótica Alzet	Corporación Durect	#9922	0,11 μl por hora, 28 días
Sistema de infusión cerebral	Corporación Durect	#8851	1-3 mm, utilizado para perfundir el fármaco en el cerebro de los ratones
glucómetro	Roche	#06870244001	Se utiliza para medir el nivel de glucosa en sangre
Chip de glucosa	Roche	#06454011020	Se utiliza para cargar la muestra de sangre
El azul de Evan	sigma	#MKBK0523V	Para demostrar el área de infusión del fármaco
Jeringa de insulina	Becton, Dickinson y compañía	#3232145 C	Se utiliza para administrar insulina por vía intraperitoneal
UNIDAD DE CONTROL MIO NE116 (taladro de uñas)	Sistema Mio	#E235-015	Para perforar un agujero en el cráneo del ratón
Proteína CCL5/Met-RANTES	I+d	#ADB0111081	CCL5 humano recombinante, derivado de E-coli
Fórmula de aCSF	119 mM NaCl 26,2 mM NaHCO3 2.5 mM KCl 1 mM NaH2PO4 1.3 mM MgCl2 10 mM de glucosa		Esterilizar el filtro con un aparato de filtro de 0,22 μm y almacenar a 4 °C. El aCSF es estable durante 3-4 semanas
Anticuerpo Phospho-IRS-1 Serine302	Señalización celular	#12879	Dilución 1:1000
Anticuerpo IRS-1 (D23G12)	Señalización celular	#12879	Dilución 1:1000
Anticuerpo Phospho-Akt Serine 473	Señalización celular	#9916	Dilución 1:2000
Anticuerpo Akt (pan) (C67E7)	Señalización celular	#9916	Dilución 1:1000
Animales: C57BL/6	Laboratorios NAR		Cepa de ratones de tipo salvaje utilizada en el estudio