Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Sujetos
- Utilice ratas macho Sprague-Dawley (250-300 g a su llegada).
- Las ratas de casa están en jaulas de fondo sólido en una habitación de colonia con una humedad del 40-60% y una temperatura ambiente (RT) de 21 ± 1 °C.
- Haga que el agua y la comida estén disponibles en el libitum.
- Mantenga a las ratas bajo un ciclo de luz/oscuridad invertido de 12:12 horas (se enciende a las 20 horas).
2. Cirugía
- Por rata, prepare dos piezas de ligadura de tripa crómica (5-0) de aproximadamente 6 cm de largo y colóquelas en solución salina estéril para evitar que se sequen y se vuelvan rígidas y quebradizas.
- Anestesiar al animal con pentobarbital (60 mg/kg, intraperitoneal [i.p.]) y tratar con atropina (0,1 mg/kg, i.p.). Controle el nivel de anestesia extendiendo una pierna y pellizcando la membrana de piel entre los dedos de los pies con una uña para asegurarse de que se aplique la presión adecuada. Asegúrese de que el animal no flexione su extremidad. Si es necesario, administre pentobarbital adicional.
- Afeita la cabeza de la rata de modo que se pueda hacer una incisión en la línea media del cuero cabelludo de aproximadamente 25 mm con distancias iguales anterior y posterior al centro de los ojos.
- Fija la cabeza de la rata en un marco estereotáxico o fija la cabeza de la rata de otra manera. Coloca a la rata sobre una almohadilla térmica para mantener la temperatura corporal.
- Aplique ungüento oftálmico en ambos ojos para evitar el daño causado por la sequedad.
- Frote el área de la cabeza afeitada con alcohol, luego betadine.
- Haz una incisión en la línea media del cuero cabelludo, exponiendo el cráneo y el hueso nasal.
- Utilice un microscopio de operación para realizar los pasos 2.9 a 2.16.
- Diseccionar el borde de la órbita libre, formado por los huesos maxilar, frontal, lagrimal y cigomático, utilizando un hisopo con punta de algodón y un par de pinzas de Dumont. Use el hisopo para absorber la sangre de un posible sangrado.
- Para dar acceso al nervio infraorbitario (IoN), desvíe suavemente el contenido orbitario con un hisopo de algodón de precisión, teniendo cuidado de no estirar demasiado el nervio etmoidal anterior que cruza por encima del IoN. Diseccione la IoN libre del tejido conectivo circundante, utilizando un hisopo de precisión con punta de algodón y un par de pinzas Dumont con un movimiento de propagación. Use el hisopo para absorber la sangre de un posible sangrado.
- Para realizar una ligadura, empuje un extremo de una sola pieza de intestino crómico hacia abajo a lo largo del hueso frontal, medial al IoN y avance unos milímetros paralelo e inferior al IoN. La ligadura ahora se mantiene en su lugar entre el IoN y el hueso frontal.
- Deslice la punta de una pinza Dumont en ángulo de 45 grados debajo del IoN para colocarla muy cerca de la ligadura. Retraiga suavemente el IoN lateralmente para revelar la ligadura y la punta de las pinzas. Sujete la ligadura con las pinzas y retírelas lateralmente desde debajo de la IoN.
- Extraiga la ligadura de la cavidad orbitaria hasta que ambos extremos de la ligadura estén más o menos equidistantes del IoN.
- Haga un "nudo corredizo" desde los dos extremos de la ligadura para permitir un control perfecto sobre el grado de constricción y deslice el nudo contra el IoN. Deslice el nudo más para constreñir el IoN de modo que el diámetro del nervio se reduzca en una cantidad apenas perceptible. Haga un nudo normal en la parte superior del nudo corredizo para que la cantidad de constricción permanezca constante (es decir, ., para evitar que el nudo cortado se deslice).
- Corta las ligaduras para dejar aproximadamente 2 mm de extremos libres del nudo.
- Repita el mismo procedimiento (pasos 2.11 a 2.15) para hacer una segunda ligadura a 2 mm de distancia de la primera.
- Para la cirugía simulada, realice los pasos 2.2 a 2.10.
- Cierre la incisión del cuero cabelludo con suturas de poliéster (4-0) y permita que la rata se recupere con una almohadilla térmica. No deje al animal desatendido hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal, y no devuelva al animal a la compañía de otros animales hasta que esté completamente recuperado.
- Para evitar efectos analgésicos preventivos sobre el desarrollo de dolor neuropático, no administrar analgesia para el dolor postquirúrgico.