Este video muestra el análisis de muestras de péptidos de gránulos de neuromelanina (NMG) aislados de tejido cerebral postmortem humano. Los péptidos se separan primero mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y luego se analizan mediante espectrometría de masas para determinar sus relaciones masa-carga (m/z). Los péptidos objetivo se fragmentan para identificar las modificaciones postraduccionales y los datos resultantes se comparan con una base de datos de referencia para determinar el perfil proteómico de los NMG.
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Artículo de método
Análisis LC-MS/MS del perfil proteómico de gránulos de neuromelanina aislados de tejido cerebral humano
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28 de abril de 2025
En este artículo
Resumen
Protocolo
1. Digestión tríptica
1. Descongele las muestras en hielo.
2. Seque completamente las muestras en un concentrador de vacío.
3. Llene la muestra con 50 μL de un tampón de digestión adecuado, por ejemplo, 50 mM de bicarbonato de amonio.
4. Después de la adición d....
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Resultados
Figura 1: Corriente iónica total (TIC) de una medición DDA de 120 min. El cromatograma muestra la abundancia relativa de los iones correspondientes a los péptidos .......
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1,4-dithiothreitol | AppliChem | A1101 | |
| Acetonitrile | Merck | 1.00029.2500 | |
| Ammonium bicarbonate | Sigma-Aldrich | A6141 | |
| Ácido fórmico | Sigma-Aldrich | 56302 | |
| Iodoacetamida | AppliChem | A1666,0100 | |
| Micro Tube 500 | Carl Zeiss | 415190-9221-000 | |
| Orbitrap Fusion Lumos Tribrid mass spectrometer | Thermo Fisher Scientific | IQLAAEGAAPFADBMBHQ | |
| PALM MicroBeam | Zeiss | 494800-0014-000 | |
| Ácido trifluoroacético | Merck | 91707 | |
| Trypsin sequencing grade | Serva | 37283.01 | |
| Ultimate 3000 RSLC nano LC system | Thermo Fisher Scientific | ULTIM3000RSLCNANO | |
| Name of Software | Weblink/Company | Version | |
| FreeStyle | Thermo Fisher Scientific | 1.6 | |
| MaxQuant | https://www.maxquant.org/ | 1.6.17.0 | |
| PALMRobo | Zeiss | 4.6 pro | |
| Perseus | https://www.maxquant.org/perseus/ | 1.6.15.0 | |
| Skyline | https://skyline.ms/project/home/software/Skyline/begin.view | 20.2.0.343 | |
| XCalibur | Thermo Fisher Scientific | 4.3 |
