Caracterización de esferoides tumorales neuroendocrinos de intestino delgado mediante inmunofluorescencia

En este artículo

Resumen

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Fuente: Ear, P. H., et. al. Establecimiento y caracterización de esferoides tumorales neuroendocrinos del intestino delgado. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra la tinción por inmunofluorescencia de esferoides tumorales neuroendocrinos del intestino delgado. Los esferoides se fijan, permeabilizan y bloquean y luego se incuban con anticuerpos primarios y secundarios. Se añade un tinte a los núcleos de tinción antes de montarlos y visualizarlos bajo un microscopio fluorescente.

Protocolo

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1. Colección de tumores neuroendocrinos del intestino delgado (SBNET) y disociación

celularObtenga muestras de SBNET de pacientes resecadas después de la confirmación de tejido tumoral del Núcleo de Patología Quirúrgica.
Corta SBNETs en cubos de 5 mm y guárdalos en 25 mL del medio Modified Eagle Medium (DMEM)/F12 de Dulbecco en un tubo cónico para transportarlos al laboratorio.
Transfiera los tum....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Anti-rabbit FITC	Jackson ImmunoResearch	11-095-152	Pareja de anticuerpos secundarios a un fluoróforo verde
Autostainer Link 48	Agilent Dako	Not Available	Sistema automatizado para la tinción
Cell	Thermo Scientific	5100-0001	Container to for freezing cells
CellSence	Olympus	Version 1.18	Software de ordenador para usar microscopio
Chromogranin A antibody	Abcam-45179	RB-9003-PO	Anticuerpos para IF
Collagenase	Sigma	C0130	Enzima para digerir tejido
DMEM	Gibco	11965-092	Medium for tissue preparation
DMEM/F12	Gibco	11320-033	Medio para cultivos
DNAse	Sigma	DN25	Enzima para digerir tejido
FBS	Gibco	16000044	Reactivo para medios de cultivo<
Olympus	CKX35	Microscopio para tomar imágenes de esferoides
Glutamine	Gibco	A2916801	Reactivo para medios
Insulin	Sigma	I0516	Reactivo para medios
Matrigel	Corning	356235	Matriz para incrustar y anclar organoides
Mounting medium (VECTASHIELD)<	H-1200	Fijador para células-marcadas con una tinción
Nicotinamide	Sigma	72340	Reactivo para medios
Paraformaldehyde	Electrónica Microscopy Sciences	15710	Reactivo para fijar células
PEN/STREP	Gibco	15140-122	Reactivo para medios
SSTR2 antibody	GeneScritp	A01591	Anticuerpos para IF
Sinaptophysina anticuerpo	Abcam	32127	Anticuerpos para IF
TritonX	Mallinckrodt	3555 KBGE	Reactivo para permeabilizar células
Y-2763 ROCK inhibitor	Adipogen	AG-CR1-3564-M005	Para mejorar la viabilidad del esferoide SBNET después de la congelación y descongelación

de anticuerpos freezing container fluorescente tumoral de organoides tumoraltd style='height:14.5pt;width:149pt;'>Microscopio fluorescente SBENT de cultivo de cultivotd style='width:153pt;'>Vector Laboratories nuclear de cultivo de cultivo

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