Inducción de pérdida de audición en ratones a través de la exposición prolongada al sonido a alto volumen

Resumen

Fuente: Lee, D. et. al., Condiciones experimentales modificadas para la pérdida de audición inducida por ruido en ratones y evaluación de la función auditiva y el daño de las células ciliadas externas. J. Vis. Exp. (2023)

Este video muestra el procedimiento de la pérdida auditiva inducida por ruido en ratones. El sonido de alto volumen daña las células ciliadas del oído interno e interrumpe las vías auditivas, lo que provoca una discapacidad auditiva.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Inducción de la pérdida auditiva inducida por ruido (NIHL) en ratones

1. Prepare la jaula para los ratones experimentales
   1. Para ello, utilice una jaula trampa para ratas con dimensiones de 14 cm × 17 cm × 24 cm. Corte cuatro piezas de cartón corrugado en tamaños apropiados, haciéndolas encajar en la jaula (13 cm × 23 cm y 13 cm × 16 cm).
   2. Para evitar que los ratones se corten las patas con la rejilla de malla, coloque dos de las piezas en la parte inferior y en la parte trasera, respectivamente. Coloque las otras dos piezas entrelazadas perpendicularmente entre sí, para dividir el espacio dentro de la jaula en cuartos.
2. Realice este estudio en una caja insonorizada. Coloque un altavoz a 8,5 cm delante de la jaula y coloque tanto el altavoz como la jaula en una caja insonorizada.
3. Abre el software de la aplicación CLIO.
4. Mueva el cursor hasta el icono del altavoz, luego haga clic en TwoSin. Ingrese y cambie el valor de Freq 1 a 1000 Hz, y Freq 2 a 6000 Hz, y haga clic en OK para comenzar a reproducir el sonido.
5. En la pestaña Leq, cambie decibelios Voltio (dBV) a decibelios Nivel de Presión Sonora (dBSPL). Después de configurar la hora en la interfaz del software, haga clic en el botón del triángulo verde para reproducir el sonido.
6. Coloque un micrófono frente al altavoz a una distancia de 8.5 cm para calibrar el nivel de ruido (Figura 1). Ajuste el nivel de ruido a 125 dB SPL-A y monitoree continuamente durante no menos de 3 minutos para asegurarse de que el nivel de ruido sea lo suficientemente estable. Utilice un generador, un analizador y un amplificador para crear y controlar el ruido. (Figura 2)
   NOTA: Realice este paso en una caja insonorizada para evitar daños en la audición del operador.
7. Coloque cuatro ratones machos C57BL/6J en la jaula (uno para cada cuarto) para la exposición al ruido. Asigne aleatoriamente los ratones en cada cuarto durante la exposición al ruido. Coloque un micrófono en la parte superior de la jaula para monitorear el nivel de ruido durante la exposición al ruido (Figura 3).
   NOTA: Realice este paso en una caja insonorizada para evitar daños en la audición del operador.
8. Exponga a los ratones al ruido a frecuencias de 1 kHz y 6 kHz de forma continua durante 6 h al día, durante 5 días consecutivos.

Resultados

Figura 1: Cálculo de voltaje a partir de la calibración. Para cada frecuencia específica, el valor del voltaje seleccionado (eje horizontal) se introducirá en la curva de calibración para obtener ...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
1/4" CCP Free-field Standard Microphone Set	GRAS	428158	Para exposición
Jaula trampa para ratas			14 cm x 17 cm x 24cm
Amplificador de sonido, MT-1000	unika		For noise exposure
Generador/analizador/miscelánea de sonido, FW-02	CLIO	620300719	For noise exposure
Cámara insonorizada	IEA Electro-Acoustic Technology		For noise exposure and ABR
Speaker<		Para exposición al ruido

al ruidotd style='width:99pt;'>IEA Electro-Acoustic Tecnología