Medición de la respuesta auditiva del tronco encefálico en ratones

Resumen

Fuente: Lee, D., et. al. Condiciones experimentales modificadas para la pérdida auditiva inducida por ruido en ratones y evaluación de la función auditiva y el daño de las células ciliadas externas. J. vis. exp. (2023)

Este video muestra la medición de la respuesta auditiva del tronco encefálico (ABR) en un ratón. Se colocan electrodos en la cabeza, detrás de la oreja y cerca de la cola de un ratón anestesiado. Se emiten estímulos acústicos a varias intensidades y las señales eléctricas generadas se registran como formas de onda.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Evaluación del umbral de audición basada en la respuesta auditiva del tronco encefálico (ABR)

1. Utilice un sistema de prueba ABR comercial diseñado específicamente para animales pequeños.
2. Inyectar intraperitonealmente una mezcla de tiletamina y zolazepam (40 mg/kg) y xilacina (9,3 mg/kg) en los ratones para anestesia general.
   NOTA: La evaluación ABR tarda ~2 h. Asegúrese de proporcionar soporte térmico a través de una almohadilla térmica y aplique ungüento para los ojos para evitar la sequedad mientras el ratón está bajo anestesia.
3. Mida el ABR en el ratón bajo anestesia general. Coloque electrodos de aguja subdérmicos (12 mm) en el vértice, detrás del pabellón auricular izquierdo y cerca de la cola para medir el umbral de audición.
4. Presentar estímulos acústicos mediante un altavoz colocado a 1 cm de la oreja izquierda del animal.
5. Utilice un osciloscopio para controlar los estímulos acústicos. Elija Onda sinusoidal para los estímulos y 10 k para la escala de ventana. Gire la perilla Frequency para obtener la frecuencia deseada de los estímulos acústicos.
6. Ajuste la intensidad del estímulo girando la perilla amplitude o AMLP en el generador de funciones. Obtenga la intensidad de estímulo deseada girando la perilla AMLP a un voltaje adecuado, calculado a partir de la calibración.
7. Recoja las mediciones de ABR bajo una serie de intensidades de estímulo, desde 10 dB de nivelador de presión sonora o SPL hasta 100 dB SPL, con un tamaño de paso de 10 dB.
   NOTA: Mida el umbral de audición en una caja insonorizada. Se asumió que el nivel mínimo de intensidad del estímulo que podría dar lugar a una onda V discernible en la señal recopilada era el umbral ABR (Figura 1). Después de la evaluación ABR, monitorear al animal hasta que se recupere de la anestesia (~1 h).

Resultados

Figura 1: Medición ABR de la audición. Resultados representativos de ABR a 12 kHz, recogidos el día 13 (1 semana después de la exposición al ruido). La onda V en cada intensidad se etiqueta si es discernible.

Materiales