Inducción de presión intraocular elevada en un modelo de rata

Resumen

Fuente: Lani-Louzada, R., et al., Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demuestra la inducción y monitorización de la presión intraocular (PIO) elevada en un modelo de rata. El proceso consiste en cauterizar los vasos sanguíneos limbales, lo que provoca la oclusión de los vasos y una PIO elevada. A continuación, se permite que la rata se recupere y la PIO se monitoriza regularmente tanto en el ojo experimental como en el de control para compararla.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

En el presente trabajo, se utilizaron ratas Lister Hooded de ambos sexos, de 2-3 meses de edad y con un peso de 180-320 g. Sin embargo, el procedimiento se puede adaptar en diferentes cepas de ratas de varios rangos de edad.

Cirugía de hipertensión ocular y seguimiento clínico

1. Alojar animales en un ambiente de temperatura controlada y ciclo de luz/oscuridad de 12 h (6 am: luz encendida/ 6 pm: luz apagada) con alimento estándar granulado con radiación gamma (Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, Brasil) y agua (triple filtro, con carbón activado no tóxico) disponible ad libitum.
2. Prepare una mezcla de cóctel anestésico compuesto por tres partes de clorhidrato de ketamina al 10% y una parte de clorhidrato de xilacina al 2% (diluyente: agua estéril).
3. Sujete suavemente al animal sujetando la piel dorsal e induzca la anestesia mediante la administración intraperitoneal de 1 μL/g de peso corporal de la mezcla (ketamina: 75 mg/kg; xilacina: 5 mg/kg). Verifique que la anestesia sea adecuada después de aproximadamente 5 minutos realizando una respuesta de pellizco con los dedos de los pies.
4. anestesia tópicamente ambas superficies oculares instilando gotas oftálmicas de clorhidrato de proxymetacaína al 0,5%. Espere 30-60 s y retire la solución restante de la cara anterior del globo, tocando suavemente la conjuntiva bulbar nasal o lateral con un pequeño hisopo de algodón estéril.
5. Mida la PIO de referencia de los ojos de control experimentales y contralaterales colocando al animal en una posición de decúbito ventral en la mesa de trabajo, de modo que la superficie de la córnea sea fácilmente accesible hasta la punta del tonómetro.
6. Utilice un tonómetro de mano de aplanación o de rebote (Figura 1A). Coloque la punta del tonómetro de manera que toque ligeramente la zona corneal central perpendicularmente. Adquiera y promedie de 3 a 5 promedios confiables generados por máquinas. Cada media es calculada automáticamente por el dispositivo después de seis mediciones individuales exitosas.
   1. Cargue el tonómetro de rebote con una sonda y presione el botón de medición una vez para encenderlo, mientras coloca la punta del dispositivo hacia arriba para evitar que la sonda se caiga. Después de encenderlo, la pantalla mostrará 00 indicando que el equipo está listo para medir.
   2. Coloque el dispositivo con la punta de la sonda a 1-4 mm de la córnea y adquiera las mediciones presionando rápida y cuidadosamente el botón de medición, sin mover el equipo. Cada medida exitosa se identifica mediante un pitido corto y, después de seis veces, la media se muestra en la pantalla del dispositivo.
      NOTA: A pesar de una larga experiencia con el tonómetro de aplanación, para optimizar todo el procedimiento los autores recomiendan el uso de un tonómetro de rebote, que proporciona una adquisición más fácil de una medición confiable de la PIO.
7. Coloque al animal en una ligera posición de decúbito lateral bajo un microscopio estereoscópico, y planifique cuidadosamente la cirugía inspeccionando el ojo experimental con un aumento de 40x. No olvide mantener lubricado el ojo de control contralateral durante el procedimiento instilando una gota de carmelosa sódica o hialuronato de sodio.
8. Con la ayuda de pinzas curvas, empuje suavemente hacia adelante el globo ocular experimental para exponer la vasculatura que rodea 360° del limbo. Con la otra mano, cauterice suavemente los vasos alrededor de la córnea con una cauterio oftálmica a baja temperatura (1,300 °F; Bovie Medical, EE.UU.) (Figura 1B-E).
   NOTA: La cauterio mencionada tiene una punta redonda que debe tocar longitudinalmente la vasculatura limbal.
9. Tenga cuidado de no cauterizar la periferia corneal, ya que esto puede resultar en una opacificación corneal postoperatoria, lo que impide la evaluación in vivo de la función de la retina.
10. Observe la aparición de pequeñas marcas circulares de cauterización en el limbo escleral, la obliteración de la vasculatura limbal y la dilatación de la pupila en el ojo operado, que son signos de un procedimiento quirúrgico exitoso.
    NOTA: Como la vasculatura limbal de ratas y ratones es anatómicamente similar y el cauterio utilizado tiene una punta pequeña y suave, este protocolo también puede funcionar para el ojo del ratón sin ninguna adaptación.
11. Después de la cirugía, verifique la PIO postoperatoria inmediata en ambos ojos como se describe en el paso 1.5.
12. Aplique una gota de acetato de prednisolona oftálmico (1,2 mg/mL) y manténgala en contacto con la superficie anterior del ojo experimental durante unos 40 s, luego reemplácela con una pomada oftálmica de antibióticos (clorhidrato de oxitetraciclina 30 mg/g más polimixina B 10,000 U/g; o ciprofloxacina 3.5 mg/g). Realizar una inyección intramuscular de clorhidrato de tramadol (dosis única; 2 mg/kg) para prevenir el dolor después del procedimiento.

Resultados

Figura 1: Cauterización térmica del plexo vascular limbal y consecuencias para la función de la retina in vivo. (A) Métodos alternativos para medir la PIO en ratas: tonometría de rebote (superior) y tonometría de aplanamiento (inferior). (B-E) Procedimiento quirúrgico; punta de flecha: plexo vascular limbal; flecha: pinzas curva...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Cauteriy Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Cauterio oftálmico de baja temperatura
Cetamin Syntec do Brasil Ltda
	000200-3-000003	Clorhidrato de ketamina 10%
Ecofilm	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	Carmellose sodium 0.5%
Hyabak	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	Hialuronato de sodio 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 (número de modelo)	Tonómetro
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloxacin 3.5 mg/g
Ster MD	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Acetato de prednisolona 0.12%
Terolac	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0497.1286	Ketorolac trometamol 0.5%
Terramicina	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Clorhidrato de oxitetraciclina 30 mg/ g + polimixina B 10,000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Tonómetro de mano de aplanación digital
	Carl Zeiss-Microscopio		estereoscópico para cirugía y disección de retina

de mano de rebote