Realización de una axotomía por aplastamiento del nervio facial en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Olmstead, D. N., et al., Axotomía del nervio facial en ratones: un modelo para estudiar la respuesta de las motoneuronas a las lesiones. J. Vis. Exp. (2015).

Este video muestra el procedimiento de aplastamiento del nervio facial en un ratón, donde la disección contundente a través de puntos de referencia clave expone el tronco del nervio facial en el agujero estilomastoideo. A continuación, se utilizan fórceps para comprimir el tronco nervioso, induciendo daño axonal e interrumpiendo la transmisión de señales neuronales.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Abordaje quirúrgico

1. Alinee y enfoque el estereoscopio con el campo quirúrgico. Ajuste el cono de la nariz y péguelo con cinta adhesiva para que se coloque a lo largo del borde del campo visual.
2. Con el ratón acostado sobre su lado izquierdo, pegue el borde de la oreja derecha al cono de la nariz, exponiendo el área detrás de la oreja donde se hará la incisión. Asegúrese de que la vena auricular posterior se desplace horizontalmente a través de la oreja. Tenga en cuenta que la colocación correcta del animal y el vendaje de la oreja son cruciales para encontrar rápidamente el nervio facial.
3. Humedece el pelaje sobre y detrás de la oreja con etanol al 70% y afeita el sitio quirúrgico con una navaja de afeitar o una hoja de bisturí. Humedecer previamente el pelaje facilita el afeitado en esta ubicación anatómica.
4. Limpie la piel con una solución de yodo, como el exfoliante quirúrgico Betadine (7,5% de povidona yodada), seguido de etanol al 70%. Repita esta limpieza dos veces más para desinfectar a fondo el área.
5. Para determinar dónde hacer la incisión, trace la vena auricular posterior desde la oreja caudalmente hasta el área posterior a la protuberancia de la oreja. Con unas tijeras de resorte, haga una incisión de 4 mm de 2 a 3 mm detrás de la protuberancia.
6. Diseccionar a través de la grasa subcutánea y la fascia mediante disección roma. Evite cortarse directamente con las tijeras porque los vasos sanguíneos o el tejido muscular podrían dañarse fácilmente.
7. Si se produce sangrado, aplique presión en el sitio quirúrgico con un hisopo de algodón estéril durante al menos 30 segundos. Si se produce una pérdida significativa de líquido, inyectar al ratón por vía intraperitoneal hasta 0,5 ml de solución salina estéril al 0,9% con una aguja de 25 o 27 G.
8. Utilice varios puntos de referencia clave, el nervio accesorio espinal, el canal auditivo y el músculo digástrico anterior (descrito a continuación), para localizar el nervio facial. Disecciona alrededor de estos puntos de referencia hasta que se visualicen las ramas del nervio facial. El nervio aparecerá como una estructura blanca sólida significativa cuando se revele, y una capa de fascia lo adhiere a las estructuras subyacentes.
   1. Encuentra el nervio accesorio espinal, que viaja desde la porción caudal del cráneo para inervar el músculo trapecio una vez que se han diseccionado la grasa subcutánea y la fascia. El nervio facial es profundo hasta el nervio accesorio espinal.
   2. Encuentre el canal auditivo cartilaginoso que se ve de color blanco nacarado y se puede ver rostral al nervio facial.
   3. Encuentra el vientre muscular del músculo digástrico anterior que se encuentra en la parte superior y caudal del nervio facial.
9. Cuando se visualizan las ramas principales del nervio facial, trázalas dorsalmente para encontrar su origen en el agujero estilomastoideo. Usando pinzas Dumont de punta fina #5/45 para mantener abierto el sitio quirúrgico, avance las puntas de las tijeras de resorte siguiendo la trayectoria del nervio, luego mueva las pinzas dorsalmente para mantener abierta el área recién avanzada.
10. Visualice el tronco del nervio facial con las ramas cigomática, bucal y mandibular marginal en este punto.
    NOTA: La rama temporal se encontrará más cerca del foramen. El nervio mandibular marginal se ramifica en sus partes superior e inferior más cerca de la mandíbula, por lo que esas ramas nerviosas no serán visibles a este nivel.
    1. Si realiza una lesión por aplastamiento, use pinzas Dumont # 5/45 para comprimir el nervio durante 30 segundos usando presión constante para cortar todos los axones, luego repita este aplastamiento en un segundo ángulo perpendicular al primer sitio de aplastamiento. Evite aplicar cantidades variables de presión durante el aplastamiento de 30 segundos, de lo contrario, la lesión será inconsistente entre los animales.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Stereo Microscope	Leica	M60
Cinta de etiquetado	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tübingen Spring Scissors - Straight/Sharp/8.5cm/5mm cutting edge	Fine Science Tools	15003-08	Esterilizar antes de usar
Dumont #5/45 Pinzas - Estándar puntas/Ángulo 45°/Dumoxel/11cm	Fine Science Tools	11251-35	Esterilizar antes de usar
0.9% Inyección de Cloruro de Sodio, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 oz, with dispenser	Fisher Scientific	19-027132
70% Ethanol
Glass Bead Sterilizer