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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Colocación de clips para aneurismas
- Coloque una pinza para aneurisma de 30 G en cada arteria uterina. Asegurar el cese del flujo sanguíneo, incluidos los pulsos proximales y distales, y el oscurecimiento de los vasos uterinos, incluidas las placentas individuales. Cubra los cuernos expuestos y todo el campo quirúrgico con gasa e irrigar con solución salina estéril. Riegue el campo aproximadamente cada 10 minutos para mantenerlo húmedo.
- Después de 60 min, retire la gasa y riegue el campo. Asegúrese de que los cuernos y vasos uterinos estén adecuadamente humedecidos para que la extracción del clip sea exitosa. Retire suavemente cada pinza del aneurisma con fórceps. Tenga cuidado de no causar traumatismo en el vaso y mantenga la integridad del tejido durante la extracción.
- Irrigar a fondo los cuernos uterinos y el campo, teniendo cuidado de eliminar los hilos de gasa sueltos de los sacos amnióticos.
2. Inyección de lipopolisacárido en sacos amnióticos
- En la base de cada saco amniótico individual, justo antes de la placa placentaria, inyecte 100 μl de lipopolisacárido (LPS) (4 μg/saco) con tinte azul de Evan diluido en el líquido amniótico. Use pinzas romas para estabilizar y rotar cada saco amniótico a una posición óptima para la inyección. El tinte azul diluido de Evan es un agente de contraste que es útil para confirmar la colocación e inyección adecuadas de la jeringa.
NOTA: Utilice únicamente una jeringa de insulina ultrafina de 0,3 ml con una aguja de 8 mm y 31 G adjunta para las inyecciones intraamnióticas. El uso de agujas de mayor calibre provocará la pérdida crónica de líquido amniótico, la muerte fetal y la reabsorción del embarazo. Las pequeñas cantidades de fuga de líquido amniótico al retirar la jeringa pueden mitigarse mediante presión directa sobre el saco amniótico. Algunos fetos de rata pueden tolerar cierto grado de oligohidramnios. Sin embargo, la pérdida aguda de líquido amniótico por una punción con agujas de gran calibre o una punción accidental que resulta en una fuga crónica de líquido resulta en la pérdida fetal y, en casos graves, en la pérdida de embarazos vecinos. - Irrigar los cuernos uterinos 3 veces con solución salina estéril.
3. Cierre de la laparotomía
- Con fórceps, regrese cuidadosamente los cuernos uterinos a la cavidad peritoneal. Asegurando un espacio adecuado entre los sacos amnióticos y la incisión de la línea media, vuelva a aproximar los bordes de la capa musculofascial con una sutura de seda 3-0 corrida. Tenga en cuenta la ubicación de los sacos amnióticos mientras cierra la incisión muscular. Tenga cuidado de no suturar dentro o a través de un saco.
- Vuelva a aproximar la capa de piel, usando una sutura de seda 3-0 corrida, cerrando la capa de piel.
NOTA: La laparotomía debe cerrarse en dos capas de suturas continuas para permitir la expansión de la piel y los músculos con el aumento de la gestación. Las suturas continuas permiten una distribución uniforme de la tensión de la herida. Las suturas interrumpidas son menos deseadas ya que los nudos múltiples son irritantes y pueden ser masticados fácilmente por la rata después de recuperarse de la anestesia. No se desean grapas quirúrgicas. Las colas de los nudos quirúrgicos deben cortarse muy cortas (<3 mm). - Inyecte 1 ml de bupivacaína al 0,125% por vía subcutánea alrededor de los bordes de la herida con una aguja de 26 G. Administrar una dosis de 0,1 mg/kg de buprenorfina por vía subcutánea en la nuca.
- Apague el isoflurano y seque la rata con una toalla según sea necesario. Coloque a la rata en una jaula casera limpia y controle su recuperación de la anestesia. Asegúrate de que la rata no sufra hipotermia.