Inducción de una contusión de la médula espinal en un modelo de ratón utilizando una plataforma coaxial para lesiones de la médula espinal

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Localización y laminectomía de la^9ª vértebra torácica (T9)

NOTA: Se compraron ratones hembra C57BL/6J de 9-10 semanas de edad de Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Jinan, China).

1. Autoclave un conjunto de instrumentos quirúrgicos para el experimento y esterilice la mesa de operaciones con alcohol al 75% antes de la cirugía.
2. Inyecte buprenorfina para analgesia (0.05-2.0 mg/kg, por vía subcutánea) 30 minutos antes de la anestesia para operaciones de lesión. Luego, anestesiar al ratón con isoflurano (inducción: ~3-5%, mantenimiento: ~1,5-2%). Compruebe si el animal está completamente anestesiado por los reflejos de la cola o el pellizco de los dedos de los pies. Una vez que la anestesia esté en efecto, coloque al ratón en posición prona en una parte designada de la mesa de operaciones y cubra la córnea con ungüento oftálmico (aplique ungüento oftálmico a las córneas para proteger los ojos de la sequedad durante la cirugía).
   1. Afeita el vello desde la caudal hasta la rostral con una afeitadora eléctrica sobre la columna toracolumbar. Esterilizar la piel varias veces con movimientos circulares con yodoforo durante 30 s, seguido de alcohol al 75%. Aplique un paño quirúrgico estéril y haga una incisión longitudinal de aproximadamente 1,5 cm en la piel desde aproximadamente la^6ª vértebra torácica (T6) hasta la^13ª vértebra torácica (T13) con bisturí y cuchilla.
      NOTA: Palpar a lo largo del margen costal hasta la línea media, donde se encuentra el espacio interespinoso de la^12ª vértebra torácica (T12) - T13. Haga una incisión de 1,5 cm en el rostral, y la incisión quedará aproximadamente al ras de las vértebras T6-T13.
3. Explore la^13ª costilla en un lado de la porción ósea bajo el microscopio quirúrgico. Explore la apófisis espinosa en la línea media tocando ligeramente el área del ángulo costovertebral y luego hacia el rostral para ubicar el espacio interespinoso de la T12-T13. Explora el espacio interespinoso de la T9 -^10ª vértebra torácica (T10) desde el espacio de la T12-T13 hasta el lado rostral. (Figura 1A, 2A)
4. Disecciona el músculo paraespinal a lo largo de la apófisis espinosa del T9 hasta las articulaciones facetarias anterior y posterior de ambos lados con micro tijeras (Figura 2B). Retraiga los músculos paraespinales con microrretractores y limpie el tejido blando en la lámina y en el espacio interespinoso de la^8ª vértebra torácica (T8) - T9 y T9-T10 con microtijeras.
5. Realice la laminectomía T9, sujete la apófisis espinosa de T9 con pinzas de microcirugía, levántela ligeramente, inserte las micro tijeras paralelamente a lo largo del lado dorsolateral derecho de la lámina, evitando dañar la médula espinal, y corte la lámina con micro tijeras. Repita en el lado izquierdo y la médula espinal puede quedar expuesta (Figura 1B, 2C).
6. Antes de fijar la vértebra, afloje el brazo universal y sujete lentamente las articulaciones facetarias 9 ^a 10 a ambos lados de la vértebra con las micro pinzas antimosquitos del estabilizador vertebral. Apriete los tornillos de las micropinzas antimosquitos y la vértebra se estabilizará. Ajuste la médula espinal al plano horizontal, apriete el brazo universal y fije la vértebra (Figura 2D).

2. Lesión por contusión T9

Figura 1. Gráfico imagenológico del método de localización de vértebras costovertebrales T13. (A) La13ª costilla y la T13 son estructuras anatómicas relativamente constantes. El ángulo costovertebral T13 se puede detectar fácilmente bajo el microscopio, desde el cual el operador puede sondear la apófisis espinosa y encontrar el espacio interespinoso T12-T13. A continuación, sondee hacia el lado rostral sucesivamente para encontrar la vértebra de la lesión objetivo (por ejemplo, T9). (B) Una laminectomía torácica 9mínimamente invasiva puede preservar las articulaciones adecuadas de la lámina y las facetas entre los cuerpos vertebrales adyacentes.

Figura 2. Exposición y contusión de la médula espinal a nivel T9 en ratones. (A) Sondeo el ángulo costovertebral T13. (B) Con el músculo paraespinal retraído por microrretractores para hacer un espacio adecuado para la operación, exponga el T9. (C) Realizar laminectomía T9 con microtijeras. (D) Estabilizar la vértebra con los clips del estabilizador vertebral. (E) Apunte al área de contusión objetivo con la punta del impactador. (F) Se observa edema y congestión en el área de la lesión después de la contusión.