Inducción de una contusión de la médula espinal en un modelo de ratón utilizando una plataforma coaxial para lesiones de la médula espinal

Resumen

Fuente: Elzat, E. Y. Y., et al., Establecimiento de un modelo de lesión medular por contusión en ratón basado en una técnica mínimamente invasiva. J. Vis. Exp. (2022).

Este video muestra el método para inducir una lesión por contusión a nivel de la médula espinal T9 en un modelo de ratón, utilizando una plataforma coaxial para lesiones de la médula espinal. Se deja caer un peso sobre la médula espinal a nivel T9 que crea una contusión que inmediatamente causa decoloración e hinchazón del tejido.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Localización y laminectomía de la^9ª vértebra torácica (T9)

NOTA: Se compraron ratones hembra C57BL/6J de 9-10 semanas de edad de Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Jinan, China).

1. Autoclave un conjunto de instrumentos quirúrgicos para el experimento y esterilice la mesa de operaciones con alcohol al 75% antes de la cirugía.
2. Inyecte buprenorfina para analgesia (0.05-2.0 mg/kg, por vía subcutánea) 30 minutos antes de la anestesia para operaciones de lesión. Luego, anestesiar al ratón con isoflurano (inducción: ~3-5%, mantenimiento: ~1,5-2%). Compruebe si el animal está completamente anestesiado por los reflejos de la cola o el pellizco de los dedos de los pies. Una vez que la anestesia esté en efecto, coloque al ratón en posición prona en una parte designada de la mesa de operaciones y cubra la córnea con ungüento oftálmico (aplique ungüento oftálmico a las córneas para proteger los ojos de la sequedad durante la cirugía).
   1. Afeita el vello desde la caudal hasta la rostral con una afeitadora eléctrica sobre la columna toracolumbar. Esterilizar la piel varias veces con movimientos circulares con yodoforo durante 30 s, seguido de alcohol al 75%. Aplique un paño quirúrgico estéril y haga una incisión longitudinal de aproximadamente 1,5 cm en la piel desde aproximadamente la^6ª vértebra torácica (T6) hasta la^13ª vértebra torácica (T13) con bisturí y cuchilla.
      NOTA: Palpar a lo largo del margen costal hasta la línea media, donde se encuentra el espacio interespinoso de la^12ª vértebra torácica (T12) - T13. Haga una incisión de 1,5 cm en el rostral, y la incisión quedará aproximadamente al ras de las vértebras T6-T13.
3. Explore la^13ª costilla en un lado de la porción ósea bajo el microscopio quirúrgico. Explore la apófisis espinosa en la línea media tocando ligeramente el área del ángulo costovertebral y luego hacia el rostral para ubicar el espacio interespinoso de la T12-T13. Explora el espacio interespinoso de la T9 -^10ª vértebra torácica (T10) desde el espacio de la T12-T13 hasta el lado rostral. (Figura 1A, 2A)
4. Disecciona el músculo paraespinal a lo largo de la apófisis espinosa del T9 hasta las articulaciones facetarias anterior y posterior de ambos lados con micro tijeras (Figura 2B). Retraiga los músculos paraespinales con microrretractores y limpie el tejido blando en la lámina y en el espacio interespinoso de la^8ª vértebra torácica (T8) - T9 y T9-T10 con microtijeras.
5. Realice la laminectomía T9, sujete la apófisis espinosa de T9 con pinzas de microcirugía, levántela ligeramente, inserte las micro tijeras paralelamente a lo largo del lado dorsolateral derecho de la lámina, evitando dañar la médula espinal, y corte la lámina con micro tijeras. Repita en el lado izquierdo y la médula espinal puede quedar expuesta (Figura 1B, 2C).
6. Antes de fijar la vértebra, afloje el brazo universal y sujete lentamente las articulaciones facetarias 9 ^a 10 a ambos lados de la vértebra con las micro pinzas antimosquitos del estabilizador vertebral. Apriete los tornillos de las micropinzas antimosquitos y la vértebra se estabilizará. Ajuste la médula espinal al plano horizontal, apriete el brazo universal y fije la vértebra (Figura 2D).

2. Lesión por contusión T9

Una vez que la médula espinal a nivel T9 esté expuesta y la vértebra esté fija, apunte a la médula espinal por la punta dentro de la manga debajo del microscopio quirúrgico (Figura 2E).

2. Compruebe si la superficie de la punta es paralela a la médula espinal desde los aspectos posterior y lateral de la médula espinal, ya que es fácil observar la relación entre la médula espinal y la punta bajo el microscopio, y la mesa de operaciones se puede girar fácilmente.
3. Compruebe si la superficie de la punta es paralela a los bordes bilaterales de la lámina preservada antes de que la punta esté en contacto con la médula espinal después de la laminectomía, ya que es un plano de referencia natural paralelo a la médula espinal.
4. Después de localizar el espacio interespinoso del T12-T13, baje el manguito hasta que el extremo del impactador sea consistente con la marca en la ventana de observación y se alcance la altura especificada de 22 mm. Tire del alfiler para liberar el peso (1,3 g, 2,0 g o 2,7 g según el grupo, con cada grupo incluyendo 3 ratones y cada grupo con un ratón para cada punto de tiempo).
   NOTA: La médula espinal debe estar paralela al suelo y perpendicular a la punta; mueva la mesa de operaciones para asegurar el campo visual microscópico, ya que la mesa es muy compacta.
5. Retire el impactador cuando la contusión esté terminada y observe el grado de lesión de la médula espinal (SCI) bajo el microscopio quirúrgico. En el grupo leve se puede observar una alteración del color rojo claro, mientras que en el grupo moderado, el sitio de la lesión exhibe un rojo oscuro en 3-4 s y, posiblemente, se puede observar eminencia. En el grupo severo, las manifestaciones de color rojo oscuro pueden aparecer inmediatamente, y se manifiesta una eminencia obvia en la duramadre, pero la duramadre todavía tiene una forma consistente (Figura 2F).

Resultados

Figura 1. Gráfico imagenológico del método de localización de vértebras costovertebrales T13. (A) La^13ª costilla y la T13 son estructuras anatómicas relativamente constantes. El ángulo costovertebral T13 se puede detectar fácilmente bajo el microscopio, desde el cual el operador puede sondear la apófisis espinosa y en...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Etanol	Fuyu Reactivo	64-17-5
Microscopio fluorescente	KEYENCE	BZ-X8000
Mices	Jinan Pengyue Animal ExperimentalCompany	C57BL/6J
Aparatos de microcirugía	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Todos los instrumentos de cirugía están hechos a medida	Tijeras oftálmicas, micro pinzas para mosquitos, micro pinzas para microcirugía, micro tijeras
Estación de anestesia inhalatoria de laboratorio RWD	RWD Life Science Co., Ltd	R550
Sistema de imagen microCT in vivo para animales pequeños	PerkinElmer	Quantum GX2
Plataforma coaxial para lesión de la médula espinal	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Hecho a medida (estándar de Feng)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_id=0&slg=tagGood List-default%2COpBottom%2Cuuid %2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.81386274&alias =367x5ovgn69q18g&from_uuid=136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter=1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)

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