Inmunotinción de neuronas en cortes de cerebro de ratón después de la hibridación fluorescente in situ

Resumen

Fuente: Baleriola, J., et. al., Detección de ARNm localizados axonalmente en secciones cerebrales mediante hibridación in situ de alta resolución. J. Vis. Exp. (2015)

Este video demuestra la detección de ARNm dentro de axones colinérgicos en cortes fijos de hipocampo de ratón utilizando hibridación fluorescente in situ y tinción de anticuerpos. La microscopía de fluorescencia revela la localización espacial de los ARNm marcados con sonda y la colina acetiltransferasa en las neuronas colinérgicas.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

1. Ensayo FISH seguido de inmunohistoquímica utilizando el desenmascaramiento de antígenos/ARN inducido por calor
   1. Antes de comenzar, prepare todo el material necesario:
      1. Caliente el horno de hibrid....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Custom probe targeting fossils 20-1381 del ratón Atf4 mRNA (NM_009716)	Advanced Cell Diagnostics	-	Probe
Sonda personalizada dirigida a los residuos 15-1256 del ARNm ATF4 humano (NM_001675.2)	Advanced Cell Diagnostics	-	Probe
Sonda de control negativo-DapB	Advanced Cell Diagnostics	310043	Probe
Sonda de control positivo-ratón Polr2A (opcional)	Advanced Cell Diagnostics	312471	Probe
Goat polyclonal anti-ChAT antibody	Millipore	AB144P
Medio de montaje ProLong Gold con DAPI	Life Technologies	P36935
RNAscope Fluorescent Multiplex Reagent Kit (for fluorescence detection)	Advanced Cell Diagnostics	320850	kit de hibridación in situ