Realización de inmunohistoquímica en tejido cerebral de primates no humanos

Resumen

Fuente: Eid, L. y Parent, M. Preparación de tejido cerebral de primates no humanos para inmunohistoquímica previa a la inclusión y microscopía electrónica. J. Vis. Exp. (2017).

Este video muestra la preparación de tejido cerebral de primates no humanos fijado en aldehído utilizando inmunohistoquímica previa a la inclusión para microscopía electrónica. Describe los pasos para el inmunomarcaje de una proteína neuronal específica, seguido de una reacción de peroxidasa que produce un precipitado coloreado, lo que permite la visualización de la proteína objetivo en microscopía electrónica.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

1. Pre-inclusión de inmunohistoquímica (Figura 1C)

1. Prepare una solución madre de 4 L de solución salina tamponada con Tris (TBS, 50 mM, pH 7,6) de la siguiente manera.
   1. Mida 2 litros de agua destilad....

Resultados

Figura 1: Esquemas de los pasos esenciales del protocolo. El cerebro de mono (A) se corta en secciones seriadas con un vibratomo de enfriamiento (B). A continuac.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Fosfato de sodio anhidro dibásico	Fisher scientific	S374-500
Monobásico monohidrato de fosfato de sodio	EM Science	SX0710-1
Sodium chloride (NaCl)	Fisher scientific	S271-3
Hydroxymethyl aminomethane (THAM)	Fisher scientific	T370-500
HCl	EMD	HX0603-3	1N dilution. El producto es corrosivo. Úselo con la potencia adecuada.
NaOH	EMD	SX0590-1	5N dilution. El producto es corrosivo. Úselo con la protección adecuada.
Paraformaldehyde<	P6148	4% dilution. El producto es altamente volátil en su forma de polvo y altamente tóxico. Úselo con precaución debajo de una campana de ventilación con la protección adecuada.
Acrolein (90%)	sigma	110221	3% dilution. El producto es altamente tóxico. Úselo debajo de una campana de ventilación con la protección adecuada.
Autopsy venting table	Mopec	CE400
Electronic perfusion pump	cole parmer	masterflex L/S 7523-90
Needle (perfusion)	terumo	NN-1838R	18G 1 1/2
Needle	terumo	NN-2713R	21G 1/2
Ketamine			20 mg/kg<
Xylazine			4 mg/kg
Acepromazine			0.5 mg/kg<
Scalpel
Scalpel blades	Feather lance	201011 J9913	No.22 para cirugía y No. 11 para EM
Surgical scissors
Rongeurs
Vibratome	Leica	VT 1200S	Calibra la cuchilla antes de cada uso, cuando el dispositivo lo permita
Vibratome razor blade	Gillette	GIN 642107
Glycerol	Fisher scientific	G33-4	30% de dilución
Ethylene glycol	Fisher scientific	E178-4	30% dilution
Sodium borohydride	sigma	S-9125
Normal horse serum	Jackson immunoResearch Laboratories	008-000-121	2% dilution
Gelatina de pescado frío	Aurion	900.033	0,5% de dilución. El producto original se concentra al 40%
Primary antibody, SERT	Santa Cruz biotechnology	SC-1458	1/500 dilution
Antibody primario, ChAT	Chemicon (Millipore)	AB144P	1/25 dilution
Primary antibody, TH	ImmunoStar	22941	1/1000 dilution
Anticuerpo secundario biotinilado, cabra	Vector laboratories	BA-9500	1/1000 dilution
Anticuerpo secundario biotinilado, mouse	Laboratorios vectoriales	BA-2000	1/1000 dilution
Vectastain elite ABC kit	Laboratorios vectoriales	PK6100	8.8 μL/mL de A y B cada uno
3'3 diaminobenzidina (DAB)	Sigma	D5637	0,05% dilution. El producto es altamente volátil en su forma de polvo y tóxico. No tires los residuos en el fregadero.
Peroxide 30%	Fisher scientific	H-323	0,005% dilution

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