Generación de un modelo de ratón con una lesión medular

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación de instrumentos quirúrgicos y no quirúrgicos

1. Esterilizar los instrumentos quirúrgicos y no quirúrgicos en un autoclave.
2. Limpie la mesa de operaciones quirúrgicas con etanol al 70% y caliente una almohadilla térmica a 37 °C.
3. Coloque la almohadilla térmica sobre la mesa de operaciones y cúbrala con paños quirúrgicos estériles.
   NOTA: En todos los procedimientos de supervivencia, se utiliza aquí la técnica de "No Tocar" para mantener la esterilidad.

2. Preparación de los animales y realización de la laminectomía espinal T9-T10

1. Procure ratones machos adultos (Balb/c) de 10 semanas de edad. Inducir la anestesia en cada animal utilizando un inhalador, comenzando con 5% de isoflurano y luego disminuyendo a 2-3% para mantener la sedación durante el resto de los procedimientos.
2. Confirme la anestesia completa al no provocar ninguna respuesta a la estimulación de la nocicepción inducida por el pellizco de la cola/pata.
3. Afeitar el vello sobre el dorso (de la cabeza a la cola) con una maquinilla eléctrica y luego aplicar la crema depilatoria (3 min) para eliminar el vello restante. Por último, lave el dorso con agua corriente o matorral húmedo y devuelva a los animales a sus jaulas.
   NOTA: Esto es necesario para evitar irritación adicional en la piel y contaminación química en el momento de la herida en la piel
4. Al día siguiente, aplique ungüento oftálmico en las córneas para proteger los ojos de la sequedad durante el procedimiento quirúrgico. A continuación, frote la piel con 3 preparaciones alternativas de exfoliante betadine y etanol al 70%.
5. Con un bisturí, realice una incisión en la piel (~1,0-1,5 cm) a lo largo de la línea media de la espalda a nivel de las vértebras T8-T12.
   NOTA: El nivel de las vértebras se identifica contando hacia atrás la vértebra de T13 utilizando la ubicación de las costillas flotantes que corresponden a la vértebra T13.
6. Despeje el tejido adiposo subcutáneo para acceder a los músculos paraespinales y luego diseccione lentamente para exponer los procesos espinosos y las láminas en ambos lados.
   NOTA: Realice este procedimiento con mucho cuidado para evitar sangrado excesivo o cualquier lesión en la médula espinal en este punto.
7. Realizar una laminectomía para exponer la médula espinal (vértebras T9-T10) despegando suavemente la lámina espinal con pinzas de microdisección.
   NOTA: Realice la laminectomía de manera que quede al descubierto un exceso de la médula espinal para facilitar la creación de la lesión. En el grupo de control, solo se realiza la laminectomía.

3. Realización de la lesión completa de la médula espinal (LME) T9-T10

1. Con fórceps, asegure la columna vertebral en T8 y levante para exagerar la curvatura de la columna.
2. Con unas tijeras finas, seccione la médula espinal entre las vértebras T9 y T10 hasta el suelo del canal vertebral para asegurar una transección completa.
3. Después de observar la transección completa bajo un microscopio quirúrgico, aplique un trozo de grasa subcutánea sobre el sitio de la laminectomía para proporcionar protección adicional a la médula espinal antes del cierre del sitio quirúrgico.
4. Finalmente, cierre la herida y suture los músculos paravertebrales y la fascia superficial con suturas continuas, y luego cierre la piel con clips de sutura.
5. Después de la lesión de la médula espinal, observe la defecación al día siguiente; Sin embargo, el manejo de la vejiga urinaria es mediante la evacuación manual de la vejiga.
   NOTA: La Escala de Ratón de Basso (BMS) se puede utilizar para monitorear el progreso de la recuperación funcional de las extremidades posteriores después de una lesión de la médula espinal en el día 2 y luego semanalmente.