Tinción inmunohistoquímica de biomarcadores en secciones de la neurosfera de tumores cerebrales

Resumen

Fuente: Núñez, F. J., et al. Evaluación de biomarcadores en glioma por inmunohistoquímica en cultivos de neurosfera de glioma 3D embebidos en parafina. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra una técnica inmunohistoquímica para marcar biomarcadores tumorales en neuroesferas tumorales cerebrales incluidas en parafina. Las secciones de la neurosfera se someten a una eliminación de parafina y rehidratación, seguida de un tratamiento para exponer los sitios de biomarcadores. A continuación, se aplican anticuerpos primarios y secundarios para marcar estos biomarcadores. Los anticuerpos secundarios se unen a enzimas peroxidasas conjugadas con avidina, que oxidan los sustratos cromogénicos para indicar la ubicación de los biomarcadores. Por último, se completan la contratinción nuclear y la preparación de portaobjetos para el análisis microscópico.

Protocolo

1. Inmunohistoquímica (IHQ) de neurosferas (NS) incluidas en parafina

1. Derrita la parafina colocando los portaobjetos en una rejilla metálica e incubándolos a 60 °C durante 20 min.
2. Desparafinar los portaobjetos mediante incubación en un tren de rehidratación a temperatura ambiente (RT): 3x xileno durante 5 min, 100% 2x etanol durante 2 min, 95% 2x etanol durante 2 min, 70% 1x etanol durante 2 min, y 1x agua desionizada durante 2 min. A partir de ahora, mantenga los portaobjetos en agua....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Anti-ATRX policlonal de conejo,	Santa Cruz Biotechnology	sc-15408	IHC, 1:250 dilución
Conejo policlonal anti-Ki-67	Abcam	Ab15580	IHC, dilución 1:1000
Conejo policlonal anti-OLIG2	Millipore	AB9610	IHQ, dilución 1:500
Cabra policlonal anti-conejo conjugada con biotina	Dako	E0432	IHC, 1:Dilución 1000
Vectastain Elite ABC HRP kit	Vector Laboratories Inc	PK-6100
BETAZOID DAB CHROMOGEN KIT{{TAG_ 61}}	Biocare medical	BDB2004 L/precio hasta 12/18