Un método de limpieza de tejido hidrofóbico para una muestra de tejido cerebral de rata

Resumen

Fuente: Kirchner, K.N., et al., Un método de limpieza de tejido hidrofóbico para el tejido cerebral de rata. J. Vis. Exp. (2020).

Este video muestra el método de limpieza de tejido hidrofóbico de una muestra de tejido cerebral de rata. La muestra se deshidrata secuencialmente en metanol, se trata con una mezcla de diclorometano y metanol para disolver lípidos y pigmentos, y se transfiere al éter de dibencilo para una limpieza completa del tejido, lo que permite obtener imágenes detalladas sin cortes finos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

1. Limpieza de tejidos

1. Incubar la muestra en una solución de metanol al 20%/agua desionizada al 80% durante 1 h a temperatura ambiente (RT).
2. Incubar la muestra en una solución de metanol al 40%/agua desionizada al 60% durante 1 h en RT.
3. Incubar la muestra en una solución de metanol al 60%/40% de agua desionizada durante 1 h en RT.
4. Incubar la muestra en una solución de metanol al 80%/agua desionizada al 20% durante 1 h en RT.
5. Incubar la muestra en metanol al 100% durante 1 h en RT.
6. Incubar en metanol fresco al 100% durante la noche en RT.
7. Incubar en 66% de diclorometano (DCM)/33% de metanol durante 3 h, con agitación, en RT.
8. Incubar en éter dibencilo (DBE) sin agitar. Deje la muestra en DBE hasta que esté clara y guárdela en DBE hasta la obtención de imágenes.

Materiales