Imágenes longitudinales de dos fotones de neuronas marcadas con fluorescencia en un hipocampo de ratón vivo

Resumen

Fuente: Ulivi, A. F., et. al. Imagen longitudinal de dos fotones del hipocampo dorsal CA1 en ratones vivos. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra imágenes longitudinales de dos fotones de neuronas piramidales marcadas fluorescentemente en un ratón vivo, mostrando la preparación, la alineación de las cánulas y la obtención de imágenes de dendritas y espinas dendríticas para estudiar la estructura neuronal en la región CA1 del hipocampo.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

Resultados

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo de acero inoxidable Ø 3,0 x 0,25 mm (Inner Ø 2,5 mm ) L = 500 mm	Sawade	R00303	Tubo de acero inoxidable para el anillo metálico de la cánula
Microscope Cover glass (4 mm round)	Engelbrecht Medizin and Labortechnik		Cubreobjetos de vidrio para la cánula glass
Isofluran CP, Flasche 250 ml	Henry Schein VET GmbH	798932	Liquid isoflurano para anestesia
Harvard Apparatus Isoflurane Funnel-Fill Vaporizer	Harvard Apparatus GmbH	34-1040	Vaporizador de isoflurano
Lab Active Scavenger	Gropper Medizintechnik	UV17014	Isoflurano sistema de carroñero
CMA 450 Temperature Controller	Hugo Sachs Elektronik - Harvard Apparatus GmbH	8003770	Manta térmica
Bepanthen Augen- und Nasensalbe	Bayer AG		Ophtalmic ointment
Head plates	Custom made		30 mm x 10 mm size; agujero de 8 mm de diámetro, titanio
Head plate clamp	Hecho a medida		Head plate holder
Soportes de postes de pedestal	Thorlabs	PH20E/M	Soporte de placa de cabeza
Publicación de acero inoxidable	Thorlabs	TR30/M	Soporte de placa de cabeza
Publicación de acero inoxidable	Thorlabs	TR75/M	Soporte de placa de cabeza
Publicación de acero inoxidable	Thorlabs	TR150/M	Soporte de placa de cabeza
Abrazaderas de conector de poste	Custom made		Soporte de la placa
Aluminum Breadboard, 300 mm x 450 mm x 12.7 mm, M6 Taps	Thorlabs	MB3045/M	Microscope stage
7" x 4" Lab Jack	Thorlabs	L490/M	Microscope stage
Low profile mask small rate	Emka Technologies	VetFlo-0801	Anesthesia face mask holder
Power Meter Model 1918-R	Newport		Medidor de potencia
X-Cite 120Q	Excelitas Technologies		Fluorescence lamp lamp
Microscopio de dos fotones	Bruker	Ultima IV	Microscopios de dos fotones
Microscopio de dos fotones	Thorlabs	Bergamo	Microscopios de dos fotones
Plan N 4x/0.10 ∞/-/FN22	Olympus		Objetivos
Plan N 10x/0.25 ∞/-/FN22	Olympus		Objectives
LMPlan FLN 20x/0.40 ∞/-/FN26.5	Olympus		Objetivos
XLPlan N 25x/1.00 SVMP ∞/0-0.23/FN18	Olympus		Objectives
Ultafast tunable laser for 2P excitation	Spectraphysics	Mai Tai Deep See	Excitaiton lasers
Ultafast láser sintonizable para excitación 2P	Spectraphysics	InSight DS+ Dual beam	Excitaiton lasers
Ultafast tunable laser for 3P excitation	Coherent	Monaco	Excitaiton Láseres

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