Monitorización de la recuperación de células interneuromasto ablacionadas con láser en pez cebra mediante microscopía confocal

Resumen

Fuente: Volpe, B. A., et al. Ensayo de ablación y regeneración láser basado en microscopio confocal en células interneuromast de pez cebra. J. Vis. Exp.{{TAG_ 31}} (2020)

Este video demuestra el monitoreo de la recuperación de los interneuromastocitos en el pez cebra utilizando microscopía confocal, rastreando la muerte celular y la reparación a través de imágenes de fluorescencia de lapso de tiempo.

Protocolo

1. Imágenes posteriores a la ablación y microscopía de lapso de tiempo para estudiar la regeneración

Resultados

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
12-well PTFE Printed Slides	Electrónica Microscopy Sciences	63425-05
15 mM Tricaine stock solution	Sigma	E10521	15 mM Tricaine in reverse osmosis water
1X E3 + 600 μM Tricaine			Dilute 15 mM Tricaine stock 25X in 1X E3 media
1X E3 media	<	Dilute 60X E3 media a 1X en agua de ósmosis inversa (16.7 ml/L)
60 X E3 media	Todos los componentes comprados a Sigma-Aldrich		34.4 g Nacl, 1.52 g Kcl, 5.8 g CaCl2.2H2O, 9.8 g MgSO4.7H20 en agua de ósmosis inversa de 1 litro
Bx60 Microscopio compuesto con fluorescencia de lámpara de arco de mercurio	Olympus
Microscopio confocal LSM 700 equipado con láseres de 405 nm, 488 nm y 555 o 561 nm	Carl Zeiss Microscopy, LLC<	Se utilizó un láser de 5 mW y 405 nm para la ablación; Las ablaciones y las imágenes se realizaron a través de un objetivo Plan-Apochromat de 63x con una NA de 1.40
FIJI/ImageJ Software de procesamiento de imágenes	Múltiples contribuyentes		Descargable en https://fiji.sc/
Aguja de disección modificada en cuchillo para el cabello	Fisher Scientific	19010	Una pestaña estaba pegada en el extremo de una aguja de disección con mango de madera
Microsoft Excel software	Microsoft Corp.		Google sheets es una alternativa sin costo a Microsoft Excel
Platos de 35 mm con fondo de cristal con cubreobjetos n.º 1.5, ventana	Mattek Corporation	P35G-1.5-20-C	35 mm placa de Petri, ventana de vidrio de 20 mm
Immersol 518F Immersion Oil	Fisher Scientific	12-624-66A
Low Gelling Agarose	Sigma Life Science	A9414-256
Inserto Corning Netwell con malla de poliéster de 74 mmm, inserto de 24 mm	Millipore Sigma	CLS3479-48EA
Rstudio software	Rstudio PBC		Descargable en https://rstudio.com/
Microscopio estereoscópico SMX-168-BL	Motic
Transfer Pipette	Fisher Scientific	13-711-7M
ZEN software	Carl Zeiss Microscopy, LLC<

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