Incrustación del cerebro de Drosophila en una matriz para obtener imágenes de lapso de tiempo de las neuronas del reloj circadiano

Resumen

Fuente: Sabado, V. , et al., Nagoshi, E. Imágenes en vivo de fluorescencia de resolución de una sola célula de Drosophila Relojes circadianos en el cerebro de las larvas Cultura. J. Vis. Exp. (2018).

Este video muestra el procedimiento para incrustar el cerebro de Drosophila en una matriz de fibrina, seguido de imágenes de fluorescencia de lapso de tiempo de las neuronas del reloj circadiano para analizar la actividad rítmica sincronizada con los ciclos de luz/oscuridad.

Protocolo

1. Incrustación de explantes cerebrales en una matriz 3D y montaje (~20 min).

Resultados

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
KH2PO4	Sigma-Aldrich	P5655	No estoy seguro de que sean exactamente los mismos que tenemos en el laboratorio. Elegí "adecuado para el cultivo de células de insectos" siempre que esté disponible
CaCl2	Sigma-Aldrich	C7902
MgSO4.7H2O	Sigma-Aldrich	230391
NaCl	Sigma-Aldrich	S5886
NaHCO3	Sigma-Aldrich	S5761
D-(+) Glucose	Sigma-Aldrich	G7021
Yeast extract	Sigma-Aldrich	Y1000
Insulin	Sigma-Aldrich	I0516-5ML
Penicillin-Streptomycin	Sigma-Aldrich	P4333<
BIS-TRIS	Sigma-Aldrich	B4429
L-(−)-Ácido málico	Sigma-Aldrich	M7397
D-(+)-Trehalosa dihidratada	Sigma-Aldrich	T0167
Ácido succínico	Sigma-Aldrich	S9512
Ácido fumárico	Sigma-Aldrich	F8509
α-Ketoglutaric acid	Sigma-Aldrich	K1128
Non-heat-inactivado, Foetal Calf Serum (FCS) Mycoplasma y Virus examinados	BioConcept Ltd. Amimed	2-01F30-I
HEPES-KOH, pH 7.4	E&K Scientific Products	EK-654011
KCl	Sigma-Aldrich	P5405
NaH2PO4	Sigma-Aldrich	S5011
Sacarosa	Sigma-Aldrich	S7903
Fibrinógeno del plasma bovino	Calbiochem (Merck)	341573-1GM	ATENCIÓN: Nocivo por inhalación, en contacto con la piel y si se ingiere. Manipular bajo flujo laminar
Thrombin from bovine plasma	Sigma-Aldrich	T9549	PRECAUCIÓN: Peligro para la salud, use guantes
PDF, NH2-NSELINSLLSLPKNMNDA-OH	Chi Scientific	custom made
Vaccum grease	Sigma-Aldrich	18405
35 mm Dish, No. 1.5 Coverslip, 20 mm Glass Diameter, Uncoated	MatTek	P35G-1.5-20-C
Corning Falcon Placas de cultivo de tejidos de fácil agarre	Fisherscientific	08-772A
Sterile 500 mL Steritop-GP 33 mm filtro de tapa de botella roscada, 0.22 μm	Millipore	SCGPS05RE
Película de politetrafluoroetileno (PTFE)	Dupont	200A Teflon FEP Film
Unidad de filtro de jeringa Millex-HV, 0.45 μm, PVDF, 33 mm, esterilizado con rayos gamma	Millipore	SLHV033RS
Unidad de filtro de jeringa Millex-GV, 0.22 μm, PVDF, 33 mm, esterilizado con rayos gamma	Millipore	SLGV033RS
Plato de disección de vidrio de tres pocillos	Any company
Pinzas finas, tamaño 5, Dumont	Fine Science Tools	11254-20
Escáner en tándem microscopio confocal TCS SP5 invertido, con escáner resonante y detectores fotomultiplicadores HyD<
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